מיקרו-מערך נוגדנים: טכניקה לחקר ביטוי החלבונים של תאי סרטן ריאה שטופלו ב-miRNA

0 views • 3:02 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- התחילו בהוספת תמיסת ביוטין וחיץ תיוג לדגימת החלבון. לדגור כדי להקל על התקשרות של ביוטין לחלבונים. הוסף מגיב עצירה ומערבולת. לאחר מכן, הניחו שקופית microarray נוגדנים בצלחת המכילה מגיב חוסם כדי למנוע קשירה לא ספציפית של נוגדנים. שטפו את המגלשה במים מזוקקים פעמיים כדי להסיר את תמיסת החסימה. מקם את שקופית המיקרו-מערך בתא. ערבבו את דגימת החלבון הביוטינילציה עם תמיסת צימוד והוסיפו לשקופית כדי להקל על קשירת חלבוני המטרה לנוגדנים המתאימים להם. מעבירים את המגלשה לצלחת המכילה חיץ כביסה ומחליפים את החיץ במים מזוקקים כפולים. לאחר מכן, מקם את השקופית במאגר זיהוי המכיל סטרפטאווידין המסומן באופן פלואורסצנטי כדי לקדם את קשירתו לחלבונים הביוטינילטים.

דוגרים על המנה בחושך כדי לשמור על עוצמת הפלואורסצנטיות. הסר את השקופית והנח אותה בסורק microarray. הסורק מחפש אותות פלואורסצנטיים מהסטרפטאבידין הקשור לחלבון המטרה. בהתבסס על עוצמת הפלואורסצנטיות, התוכנה מנתחת את מידת ביטוי החלבון. בפרוטוקול הבא, אנו מבצעים מיקרו-מערך נוגדנים לניתוח שינויים בביטוי גנים הקשורים למחזור התא.

- ניסוי זה נועד לזהות את כל שינוי הביטוי של חלבוני מסלול מחזור התא על ידי טיפול המיקרו-רנ"א. לאסוף דגימות חלבון בהתאם להליך המתואר בסעיף transfection ולכמת עם בדיקת BCA. הסירו את המגלשות ממינוס 4 מעלות צלזיוס שעה לפני הניסוי כדי להביא לטמפרטורת החדר ולהסיר לחות. קח 70 מיקרוגרם של דגימות חלבון והכן שקופיות מדגם על פי הוראות היצרן, אשר מתואר גם צעד אחר צעד בסעיף הטקסט.

כאן כדי לציין, שטיפה נכונה של שקופיות עם מים deionized ultrapure הוא צעד חשוב נוסף כמו זה יעזור להפחית את הרקע של שקופיות. בנוסף, קריטי מאוד בניסוי זה לא לייבש את שקופיות הדגימה עד לשלב הסופי. לבסוף, סרוק את השקופית באמצעות מכונת microarray ונתח את הנתונים.

13:21

נוגדן microarray כימי חסומים פרופיל תפוקה גבוהה מרובב של Glycosylation חלבון מסוים בדגימות מורכבות

Related Videos

0 Views

06:26

ניתוח של המעבר צומת הפער תלוי מירנה עם מיקרוסקופיה 3D-FRAP

Related Videos

0 Views

06:01

חלבון חוץ-תאית הטכנולוגיה Microarray לגילוי תפוקה גבוהה של אינטראקציות קולטן-ליגנד זיקה נמוכה

Related Videos

0 Views

07:04

ביצוע ניסויים אישית microarray MicroRNA

Related Videos

0 Views

15:17

סרטן המעי הגס Cell Surface חלבון פרופיל שימוש microarray ו ריבוב נוגדן פלואורסצנטי

Related Videos

0 Views

16:24

פרופיל של מיקרו RNA המוסדר אסטרוגן בתאי סרטן השד

Related Videos

0 Views

10:16

דור שני צבעים Antigen Microarrays לאיתור סימולטני של IgG ו- IgM נוגדנים עצמיים

Related Videos

0 Views

08:14

MicroRNA מבוסס נוזלי ביופסיה: החוויה של miRNA פלזמה החתימה מסווג (MSC) לסינון סרטן ריאות

Related Videos

0 Views

07:07

ריאות microRNA פרופיל לרוחב ייחום בעכברים החשופים אוזון

Related Videos

0 Views

11:44

ניתוח של miRNA קומבינטורית טיפולים כדי להסדיר מחזור התא, אנגיוגנזה

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026