הכנת ריאות עכבר לציטומטריית זרימה: יצירת תרחיף תאים מרקמת הריאה לאנליזה ציטומטרית של זרימה

- התחילו בלקיחת עכבר שעבר המתת חסד ואבטחו אותו על לוח דיסקציה בעזרת סרט מעבדה. השתמש מספריים כדי לחתוך את העור. בצע חתך אנכי דרך הסרעפת וחתך צלעות כדי להגיע לחלל החזה החושף את הלב והריאות. לאחר מכן, לבצע חתך קטן בחדר השמאלי של הלב. לאחר מכן, אתר את החדר הימני והכנס מזרק המכיל PBS לתוך לומן החדר. יש לערבב PBS דרך החדר הימני ולאפשר לדם לזרום החוצה מהחתך המוכן מראש בחדר השמאלי עד שהריאות הופכות ללבנות. מוציאים את רקמת הריאה המכילה גושים סרטניים וטוחנים לחתיכות קטנות.

לדגור את החתיכות במאגר עיכול הריאות. Collagenase במאגר העיכול של הריאות עוזר לבודד תאים, ו- DNAse עוזר לסלק DNA מהתאים המתים. מסננים את המתלה שנוצר דרך מסננת תאים כדי להסיר גושים ולהפוך את תרחיף התא לאחיד. צנטריפוגה ולהשהות מחדש את הגלולה במאגר אשלגן אמוניום כלורי כדי ליז אריתרוציטים שיורית. צנטריפוגה לאיסוף WBCs ותאי הגידול בכדורית. השהה מחדש את הגלולה ב- PBS בתוספת FCS, כדי לשמור על יציבות התא. בפרוטוקול הבא נדגים את הכנת תרחיף תאי הריאה לאנליזה ציטומטרית של זרימה.

לאחר נקודת הסיום הניסויית המתאימה, השרו את הפגר באתנול 70% ואבטחו את בעל החיים ללוח נתיחה. בצעו חתך בקו האמצע הגחוני והפכו בעדינות את העור כדי לחשוף את שרירי דופן בית החזה ואיברי הבטן. השתמש מספריים כדי לנקב את הסרעפת לחתוך את הצלעות לחשוף את חלל החזה. חתכו פ