בדיקת היווצרות מושבה: הערכת היעילות של חומרים אנטי-סרטניים על תאי סרטן ריאה יוצרי מושבה

- בדיקת היווצרות המושבה היא אנליזה חוץ גופית של תרופה אנטי-סרטנית על גדילת התא הסרטני, מתרבה ומתמיין למושבות במדיה מוצקה למחצה. כדי להתחיל, זרע תאים סרטניים בתווך RPMI עם תוספת גדילה - נסיוב בקר עוברי, או FBS, ואנטיביוטיקה. לדגור על התאים למשך הזמן הנדרש.

לאחר מכן, לאסוף את הריכוז הרצוי של תאים בצינור microfuge וצנטריפוגה. השהה מחדש את הגלולה ב- PBS. הכינו מדיום מבוסס מתילצלולוז, והוציאו אותו לצינורות שונים עם FBS כדי לקדם צמיחה אופטימלית.

מוסיפים כמות מתאימה של תרחיף תאים בצינורות, ומערבלים אותם כדי לערבב את התאים עם המדיום. לאחר מכן, הוסף תרכובות אנטי סרטניות בצינורות, והכן בקרה על ידי הוספת DMSO. צינורות מערבולת.

מוסיפים את תערובת התאים לצלחת התרבית, ודגרים למשך הזמן הרצוי. לאחר הדגירה, להוסיף methylthiazol diphenyltetrazolium bromide, או MTT, ולדגור במשך זמן מה. MTT מפחית מלח טטרזוליום צהוב בתאים ברי קיימא לגבישי פורמזן סגולים. מושבות בנות קיימא הופכות לסגולות. צלם את התמונות באמצעות מצלמה דיגיטלית, ונתח את המושבות בנות קיימא. בפרוטוקול הבא נלמד בדיקת היווצרות מושבות להערכת הפעילות של חיקוי הידרוקסיקומרין OT48 ו-BH3 בסרטן ריאות.

- בתור התחלה, צלחת 20,000 תאים A549 לסנטימטר מרובע ב 15 מיליליטר של RPMI 1640 תווך תרבית תאים, בתוספת 10% FBS ו 1% אנטיביוטיקה בבקבוק 75 סנטימטרים רבוע