Zebrafish Xenograft Assay: שיטה להערכת היעילות האנטי-סרטנית של טיפולים על גידולים בדגי זברה in vivo
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:56 דק׳ • April 30th, 2023
- ראשית, מניחים את הביצים בצלחת פטרי, ומוסיפים את התמיסה של דניאו כדי לשמור על ביצים טריות שנאספו. מוסיפים פניל תיוראה כדי לעכב פיגמנטציה ולדגור במשך כמה ימים. לאחר הדגירה, dechorionate את העוברים באמצעות מלקחיים חדים ולתת להם לגדול עוד יותר.
לאחר מכן, זרעו את המספר הרצוי של תאים סרטניים בבקבוק תרבית ודגרו בן לילה. עכשיו להוסיף תרכובות אנטי סרטניות לדגור עוד. לאחר הדגירה מוסיפים צבע פלואורסצנטי למעקב אחר תאים, אשר ייקשר לקרום התא ויכתים את התאים.
לאחר מכן, הוסף טריפסין לדיסוציאציה של תאים ודלל את התאים בתמיסת PBS האדומה פנול לפני ההליך להערכת pH. הר עוברי דגי זברה מורדמים על צלחת אגר. עכשיו לטעון את microcapillary עם השעיה תאים סרטניים להזריק אותו לתוך שק החלמון של עוברים.
להחזיר עוברים לצלחות תרבית המכילות את התמיסה של דניאו ולדגור הלאה. לאחר מכן, להעביר כמה עוברים על שקופית זכוכית ולהוסיף methylcellulose כדי לשתק אותם. הניחו את המגלשה תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי וכמתו את גודל הגידול באמצעות התוכנה.
תרכובות אנטי-סרטניות בדרך כלל מעכבות את יכולת יצירת הגידול של תאים סרטניים. בפרוטוקול הבא נחקור את ההשפעה של הידרוקסיקומרין, יחד עם BH3 מימטי, על היווצרות גידולים בדגי זברה in vivo.
- לאחר זריעת תאי A549 ודגירתם בתרכובות על פי פרוטוקול הטקסט, 24 שעות לפני סיום הטיפול, יש להוסיף ארבעה מיק
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים