אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:59 דק׳ • April 30th, 2023
- מיקרו-רנ"א, או miRNAs, הם רנ"א קטן שאינו מקודד המעורב בבקרת גנים. הבעותיהם משתנות במהלך הסרטן, ולכן הם סמנים ביולוגיים פוטנציאליים לסרטן. כדי להתחיל בידוד miRNA, יש לקחת דגימת דם שלמה טרייה וצנטריפוגה בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס כדי להפריד פלזמה מתאי הדם. העבירו את הסופרנאטנט שוב לצינור וצנטריפוגה טריים כדי לקבל סופרנאטנט פלזמה צלול יותר. לחלץ את supernatant, לטפל עם תמיסת הומוגניזציה צוננת, ואחריו חיץ lysis כדי הומוגניזציה של הדגימה. הוסף תמיסת אנזים פרוטאינאז K כדי לפרק חלבונים, במיוחד את הנוקלאזות שאחרת היו מעכלות RNA במהלך שלבים במורד הזרם.
- לאחר מכן, טען את הליזט לבאר המיועדת של מחסנית מיצוי חומצת גרעין ספציפית למכשיר שהורכב מראש. הוסף פתרון DNase 1 לבאר המתאימה כדי לחסל DNA גנומי מהדגימה. הוסיפו מים נטולי נוקלאז לצינור האלוציה המורכב על המחסנית לצורך ריכוך לפני בידוד miRNA. טען את מכלול המחסנית לתוך מחלץ חומצות הגרעין. בחר והפעל את תוכנת הטיהור miRNA המתאימה. בסיום, הסר את צינור האלוציה המכיל miRNA ואחסן בטמפרטורה של מינוס 80 מעלות צלזיוס.
- בפרוטוקול הבא, אנו מראים מיצוי miRNA מדגימות דם של חולים לצורך בדיקת סרטן ריאות.
- כדי להתחיל פרוטוקול זה, השתמש בצינורות vacutainer כדי לאסוף 10 מיליליטר של דגימת דם שלמה. יש לאחסן בטמפרטורת החדר.
- אין לאחסן דם שלם בטמפרטורה נמוכה, כ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים