צביעה אימונוהיסטוכימית: שיטה לקבלת מידע מרחבי מקטעי רקמה דקה

0 views • 4:52 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- התחילו בהנחת מקטע רקמה דק בתמיסת אמוניה כדי לאפשר שליפת אנטיגן עדינה. העבר את המקטע לשקופית מצופה פוליליזין. תאים טעונים שלילית נקשרים לפוליליזין הטעון חיובית. לאחר מכן, הוסף מי חמצן כדי לחסום את פעילות peroxidase אנדוגני. שטפו את המגלשה ב-Tris-Buffered Saline, TBS.

TBS מקדם את הגישה של הנוגדנים לאנטיגנים על ידי שבירת הצלבות החלבון. שטפו את החלק בתמיסת בלוקים כדי להפחית את קשירת הנוגדנים הלא ספציפיים. מוסיפים נוגדנים ראשוניים לאזור ודגורים למשך הלילה. הנוגדן הראשוני נקשר לאנטיגן הספציפי שלו שנמצא על פני התא. שטפו את המגלשה עם TBS.

הוסף נוגדנים משניים מצומדים של ביוטין המתחברים לאזור Fc של הנוגדן הראשוני. שטפו את החלק עם אנזים סטרפטווידין-ביוטין פרוקסידאז. לאחר מכן, להוסיף מצע כרומוגני של peroxidase לרקמה. פרוקסידז ממיר כרומוגן למוצר צבעוני בלתי מסיס.

כתם נגדי את הרקמה עם תמיסת hematoxylin. Hematoxylin נקשר למרכיבים החומציים של התאים והופך אותם כחולים. התבוננו ברקמה תחת מיקרוסקופ אור. האנטיגנים מזוהים כאדומים בעוד התאים נראים כחולים עקב המטוקסילין. בפרוטוקול הבא, נבצע צביעה אימונוהיסטוכימית לזיהוי תאי CD45 ו- CD1a מביופסיות אנדוברונכיאליות.

- לפני חתך רקמת הביופסיה המשובצת, כוונן בזהירות את מחזיק הסכין בזווית גוש הביופסיה כך שהלהב יונח שטוח על פני השטח של הבלוק. לאחר מכן חתכו באיטיות לפחות שני מקטעים בעובי 2 מיקרון מכל דגימת ביופסיה אנדוברונכיאלית, תוך שימוש במלקחיים כדי להעביר כל פרוסת רקמה שזה עתה נחתכה לתמיסת אמוניה ומים מזוקקים 0.05%. לאחר 45 עד 90 שניות, השתמש במגלשת מיקרוסקופ מצופה פולי-ליזין כדי להרים כל חלק פתוח ולאפשר לחלקים להתייבש במשך שעה לפחות.

לאחר שהחלקים התייבשו, תייגו את השקופיות כמתאימות לניסוי וציירו מחסום הידרופובי סביב כל דגימה. לאחר מכן, להחיל 1 מיליליטר של פתרון בלוק peroxidase מוכן טרי על הסעיפים. לאחר 30 דקות, הסר את תמיסת בלוק הפרוקסידז ולאחר מכן שטוף את המקטעים שלוש פעמים במשך חמש דקות עם TBS, ולאחר מכן הסר את ה- TBS והוסף תמיסת חסימת BSA של 1% לדגירה נוספת של 30 דקות כדי לחסום כל קשירת נוגדנים לא ספציפית.

בתום הדגירה מוסיפים את הנוגדן הראשוני המעניין, מדולל בשחפת, ומכסים את הדגימות לדגירת לילה בטמפרטורת החדר. למחרת בבוקר, שטפו את המגלשות שלוש פעמים ב-TBS ומרחו את הנוגדן המשני המעניין במשך שעתיים בטמפרטורת החדר. בתום הדגירה, שטפו את המגלשות שלוש פעמים נוספות ב-TBS טרי ודגרו על הדגימות בתמיסה טרייה שהוכנה לאחרונה בתמיסת סטרפטווידין-ביוטין פרוקסידאז טרייה במשך שעתיים בטמפרטורת החדר ולאחר מכן שלוש שטיפות TBS נוספות.

לאחר מכן לטפל את הכלים עם מוכן טרי AEC peroxidase מצע פתרון במשך 20 עד 30 דקות. כאשר מתפתחת עוצמת הכתם הרצויה, שוטפים את המגלשות במי ברז זורמים במשך חמש דקות ומכתימים את המקטעים בתמיסת המטוקסילין מסוננת של מאייר. לאחר שתי דקות, שטפו את המגלשות במי ברז זורמים במשך חמש דקות נוספות, ואז נקזו את המגלשות וכסו את החלקים באמצעי הרכבה מימי קבוע, ייבשו את הדגימות בתנור ייבוש של 80 מעלות צלזיוס.

לאחר שהתקררו, הרכיבו את הדגימות עם אמצעי הרכבה DPX וכיסוי לניתוחן בהגדלה של פי 40 במיקרוסקופ אור.

07:52

ניתוח של התבגרות ריאתי Cell Migration הדנדריטים ובמהלך דלקת אלרגית Airway

Related Videos

0 Views

10:11

Immunohistochemical המכתים של B7-H1 (PD-L1) בפרפין מוטבע-שקופיות של רקמת לבלב אדנוקרצינומה

Related Videos

0 Views

09:33

Precision-לחתוך פרוסות ריאת עכבר לדמיין תאי דנדריטים ריאה חיים

Related Videos

0 Views

08:12

חתך דק של ההכנות פורסים עבור אימונוהיסטוכימיה

Related Videos

0 Views

20:47

טכניקה במקביל דמיינו ספציפיות וירוס CD8 + T ו-תאים הנגועים בווירוס תאים באתרו

Related Videos

0 Views

05:04

טכניקת תיוג חיסוני כדי לדמיין את לוקליזציה תת-תאית של חלבונים

Related Videos

0 Views

08:40

כימות של ביטוי חלבון ו Co-לוקליזציה שימוש חיסונית-histochemical Multiplexed מכתים והדמיה Multispectral

Related Videos

0 Views

08:54

Immunostaining סעיפים Biocytin מלא ומעובד מרקרים הנוירוכימיים

Related Videos

0 Views

08:37

בחיי עיר MHC-tetramer מכתים וניתוח כמותי כדי לקבוע את מיקום שפע, ותפקיד של אנטיגן ספציפי CD8 T תאים ברקמות

Related Videos

0 Views

11:00

הדמיה, קוונפיקציה, ומיפוי של אוכלוסיות תאים החיסונית במיקרו סביבה הגידול

Related Videos

0 Views

Last updated: 25 July 2026