צביעה אימונוהיסטוכימית: שיטה לקבלת מידע מרחבי מקטעי רקמה דקה

- התחילו בהנחת מקטע רקמה דק בתמיסת אמוניה כדי לאפשר שליפת אנטיגן עדינה. העבר את המקטע לשקופית מצופה פוליליזין. תאים טעונים שלילית נקשרים לפוליליזין הטעון חיובית. לאחר מכן, הוסף מי חמצן כדי לחסום את פעילות peroxidase אנדוגני. שטפו את המגלשה ב-Tris-Buffered Saline, TBS.

TBS מקדם את הגישה של הנוגדנים לאנטיגנים על ידי שבירת הצלבות החלבון. שטפו את החלק בתמיסת בלוקים כדי להפחית את קשירת הנוגדנים הלא ספציפיים. מוסיפים נוגדנים ראשוניים לאזור ודגורים למשך הלילה. הנוגדן הראשוני נקשר לאנטיגן הספציפי שלו שנמצא על פני התא. שטפו את המגלשה עם TBS.

הוסף נוגדנים משניים מצומדים של ביוטין המתחברים לאזור Fc של הנוגדן הראשוני. שטפו את החלק עם אנזים סטרפטווידין-ביוטין פרוקסידאז. לאחר מכן, להוסיף מצע כרומוגני של peroxidase לרקמה. פרוקסידז ממיר כרומוגן למוצר צבעוני בלתי מסיס.

כתם נגדי את הרקמה עם תמיסת hematoxylin. Hematoxylin נקשר למרכיבים החומציים של התאים והופך אותם כחולים. התבוננו ברקמה תחת מיקרוסקופ אור. האנטיגנים מזוהים כאדומים בעוד התאים נראים כחולים עקב המטוקסילין. בפרוטוקול הבא, נבצע צביעה אימונוהיסטוכימית לזיהוי תאי CD45 ו- CD1a מביופסיות אנדוברונכיאליות.

- לפני חתך רקמת הביופסיה המשובצת, כוונן בזהירות את מחזיק הסכין בזווית גוש הביופסיה כך שהלהב יונח שטוח על פני השטח של הבלוק. לאחר מכן חתכו באיט