אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:59 דק׳ • April 30th, 2023
- טיפול פוטודינמי או PDT הוא טיפול מבוסס אור המערב מולקולות פוטונסיטיזר. מולקולות אלה מופעלות על ידי אורות באורכי גל מסוימים וממירות חמצן מולקולרי הקיים בתאים למיני חמצן תגובתיים הגורמים למוות תאי. כדי להתחיל, לפתח מודל עכבר נושא גידול ריאות על ידי הזרקת הריכוז המתאים של תרחיף תאי סרטן הריאה לתוך האגף התחתון של עכבר מורדם. יש לעקוב עד שהגידול גדל לנפח מתאים.
לאחר מכן, הכינו תרחיף של הפוטונסיטייזר הרצוי הטעון במערכת העברה מבוססת ננו-חלקיקים ממוקדת סרטן ריאות. הזריקו את המתלה הזה לווריד הזנב של עכבר מורדם הנושא גידול. לספק מספיק זמן עבור photoensitizer המכיל ננו-חלקיקים להגיע לאתר הגידול ולהיכנס לתאים הסרטניים.
לאחר מכן, להרדים את העכבר. מקם לייזר PDT במרחק אופטימלי מעל הגידול כדי להבטיח הארה אחידה של כל נפחו. להקרין את הגידול באורך גל מתאים לזמן הרצוי. שמור על העכבר בתוך כלוב בחושך במשך 24 שעות. עקוב אחר השינויים היומיומיים בנפח הגידול. עכברים נושאי גידול מוקרן שהוזרקו להם הפוטו-נסיטייזר הראו ירידה בנפח הגידול. בפרוטוקול זה, ננתח את היעילות נגד גידולים של hypocrellin B, פוטונסיטייזר, עטוף בננו-חלקיקי סרמיד חומצה היאלורונית בעכברים נושאי גידול A549.
קצרו תאי A549 והשהו מחדש מיליון תאים ב-0.1 מיליליטר של מדיום RPMI 1640. הניחו את התאים המרחפים מחדש על קרח. לאחר מכן, הכינו עכבר עירום זכר BALB/C להזרקה. לאחר מכן לטעון את התאים לתוך מזרק 1 מיליליטר מצויד מחט 26 מד להזריק אותם לתוך האגף השמאלי של העכבר. למדוד את גודל הגידול עם קליפרים כל יום.
כאשר גודל הגידול מגיע לנפח של כ-200 מילימטרים קובייתיים, התחילו את הניסוי בשקילה ראשונית של כל עכבר. לאחר מכן ממיסים את הננו-חלקיקים ב-PBS לריכוז סופי של 2 מיליגרם למיליליטר ומעמיסים מיקרוליטר אחד של התרחיף לגרם עכבר לתוך מזרק של 1 מיליליטר המצויד במחט של 26 מד. הזריקו את הננו-חלקיקים באמצעות הזרקת ורידים בזנב בימים אפס ושבע.
24 שעות לאחר כל הזרקה, מרדימים את העכבר ומניחים את סירת הגידול מתחת לסיב הטיפול הפוטודינמי כך שיהיה סנטימטר אחד מהסיב.
חשוב לכסות את כל שטח הגידול באור על מנת להשיג את התוצאה הטובה ביותר.
הרכיבו את משקפי הבטיחות בלייזר, כבו את מתג החדר והאירו את הגידול בלייזר טיפול פוטודינמי למשך 500 שניות בשני הימים הראשון והשמיני. לאחר טיפול בלייזר, החזיקו את העכברים בכלוביהם בחושך למשך 24 שעות. מעקב חזותי אחר נפח הגידול והשינויים באתר הגידול מדי יום. השתמש בקליפרים כדי למדוד את גודל הגידול וצלם תמונות של אתרי הגידול מדי יום כדי לבדוק שינויים בפני השטח.