בידוד אקסוזום: טכניקה להפרדת אקסוזומים מהפלזמה של חולי סרטן ריאות מסוג תאים לא קטנים

- אקסוזומים הם שלפוחיות קטנות הקשורות לקרום הנושאות ביומולקולות כמו שומנים, חלבונים, DNA, mRNA ומיקרו-רנ"א. אקסוזומים משתחררים על ידי סוגי תאים שונים לחללים חוץ-תאיים וניתן לבודד אותם מנוזלים ביולוגיים כמו פלזמה.

כדי להתחיל, צנטריפוגה את דגימת הפלזמה כדי להסיר תאים ופסולת. מעבירים את העל-נאטנט של הפלזמה לתוך צינור טרי. לטפל פלזמה עם הריכוז הרצוי של אנזים ribonuclease. יש לדגור על הדגימה על גוש חימום בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך זמן מתאים.

האנזים מפרק כל RNA חופשי בדגימה, בעוד שהרנ"א האקזוסומלי נשאר מוגן. לדלל את הדגימה באמצעות PBS. לאחר מכן, להוסיף את הריכוז הרצוי של תמיסת אנזים Proteinase K ולדגור ב 37 מעלות צלזיוס לזמן מתאים. פרוטאינאז K מפרק את רוב חלבוני הפלזמה. הוא גם משבית את אנזים הריבונוקלאז שנוסף בעבר, ובכך מבטל את הסיכון לפירוק RNA אקסוזומלי במהלך עיבוד במורד הזרם.

הוסף נפח מתאים של מאגר משקעים אקסוזום כדי להקל על הפרדה אקסוזום מהפלזמה. צנטריפוגה את הדגימה כדי לקבל גלולה המכילה אקסוזומים שלמים. האקסוזומים המבודדים מוצאים יישומים בשלבים במורד הזרם כמו RNA ומיצוי חלבונים.

בפרוטוקול הבא נבצע בידוד אקסוזום מדגימת פלזמה של חולי סרטן ריאה מסוג תאים לא קטנים.

- כדי להתחיל, הפשירו דגימת פלזמה של 1 מיליליטר על קרח. לאחר ההפשרה, הפוך את הצינור מספר פעמים כדי לפרק את כל cryopre