אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 5:29 דק׳ • April 30th, 2023
- קח חוט פונקציונלי עם תאים מחוברים על פני השטח שלה מוכתמים על ידי צביעה immunofluorescence. שטפו אותו במי מלח קרים כקרח, נתרן ציטראט או תמיסת SSC. הכניסו את החוט למיקרו-צינורית המכילה גשושיות עם תיוג פלואורסצנטי, וסגרו אותו עם פקק תיל. דוגרים על המיקרו-צינורית בתא לח כהה בתנור הכלאה בטמפרטורה של 75 מעלות צלזיוס לצורך דנטורציה של הדנ"א בתוך התאים.
מעבירים את התא לתנור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס כדי שהגשושיות ייקשרו לרצף המשלים שבדנ"א. לאחר מכן, להסיר את החדר מהתנור ולהוציא את החוט. טבלו את החוט בצינור המכיל תמיסת SSC בטמפרטורה הרצויה. שטפו את החוט עם תמיסת SSC המכילה Tween כדי להסיר בדיקות לא ספציפיות או היברידיות חלקית, ושטפו שוב במים מזוקקים.
יבשו את החוט ודגרו על הקצה המתפקד בתמיסת DAPI כדי להכתים את גרעיני התא. יש לשטוף את החוט ב-PBS ולייבש באוויר. הניחו את החוט מתחת למיקרוסקופ פלואורסצנטי. הגשושית שעברה הכלאה עם הגן המעניין מופיעה כנקודה פלואורסצנטית בגרעין התא. בפרוטוקול הבא, נבצע דגי DNA תלת-ממדיים כדי לקבוע את הטרנסלוקציה של הגן ALK בתאי סרטן ריאות.
- 3 שעות לפני פרוטוקול DNA FISH, מכוונים את תנור ההכלאה ל-75 מעלות צלזיוס, ומכוונים את תנור החימום היבש ל-37 מעלות צלזיוס. מצננים את תמיסת ה-SSC פי 0.4 ל-4 מעלות צלזיוס. שטפו את החוט שלוש פעמים בתמיסת SSC קרה כקרח פי 0.4. יבשו
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים