יצירת תאים דנדריטיים שמקורם במח עצם: שיטה ליצירת תאים דנדריטיים ממח עצם עכבר

- תאים דנדריטיים או DCs הם תאים מציגי אנטיגן מרכזיים המפעילים תאי T. בחולים לוקמיים, תאים אלה מבטאים בצורה גרועה אנטיגן הקשור לגידול ואינם מצליחים לעורר תגובה חיסונית ספציפית לאנטיגן. תאים דנדריטיים נמצאים בשפע במוח העצם. ולכן, מח העצם הוא האתר המועדף לבידוד שלהם כדי לעזור לחקור את תפקידם בסרטן.

כדי להשיג תאים דנדריטיים, חלצו את מח העצם מעצם הירך או עצם השוקה של עכבר שעבר המתת חסד באמצעות מזרק מלא מדיה כדי לשטוף אותו החוצה. צנטריפוגה והשעיה מחדש של הגלולה באמוניום-כלוריד-אשלגן או חיץ ACK לליז אריתרוציטים. עכשיו תוסיפו מדיה תרבותית כדי לעצור ליזה וצנטריפוגה. יש להשהות מחדש את הגלולה בתרבית המכילה אנטיביוטיקה. מוסיפים גרנולוציטים-מקרופאגים-גורם מגרה מושבה או GM-CSF, ומעבירים את תרחיף התא לצלחת פטרי.

דוגרים על הצלחת למשך הזמן הרצוי. GM-CSF מסייע לתאי אב להתמיין לתאים דנדריטיים. לבסוף, הפעל את התאים עם lipopolysaccharides או LPS, אשר נקשר לקולטן פני השטח של תאים דנדריטיים, וכתוצאה מכך תאים דנדריטיים מח עצם בוגרים ואימונוגניים. בפרוטוקול זה נדגים את יצירת התאים הדנדריטיים ממח עצם העכבר.

- כדי לייצר תאים דנדריטיים שמקורם במח עצם, בודדו את מח העצם מעצם הירך של עכברי נוקאאוט מסוג בר או פקטור B, כפי שהודגם, והכניסו את תאי הדם האדומים ב-5 מיליליטר של חיץ ליזה ACK, ועצרו את התגובה עם 10 מיליליטר סל"ד, בתוספת FBS של 1% לאחר חמש דקות.

לאחר איסוף תאי הדם השלמים באמצעות צנטריפוגה, יש להשהות מחדש את הגלולה בריכוז של 10 מיליליטר תרבית עד פי 2 פי 10 לריכוז של 6 תאים למיליליטר ולהוסיף 20 ננוגרם למיליליטר GM-CSF לתאים, לפני זריעת 10 מיליליטר תאים על צלחות פטרי בודדות בגודל 100 על 15 מילימטר בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני למשך שישה ימים. ביום השישי, הפעילו את תרביות התאים הדנדריטיים שמקורם במח עצם עם 25 מיקרוגרם למיליליטר LPS לצלחת.