הדמיה של דינמיקת סידן בתאי הלבלב: טכניקה לחקר שינויים בזמן אמת בריכוז הסידן הציטוסולי באי הלבלב
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 5:10 דק׳ • April 30th, 2023
- איי הלבלב הם אשכול של תאי לבלב מייצרי הורמונים הממלאים תפקיד מכריע בשמירה על הומאוסטזיס גלוקוז. ריכוז גלוקוז גבוה גורם לסגירת תעלות יוני אשלגן, ומונע אפלוקס יוני אשלגן, מה שמוביל לדפולריזציה של הממברנה. כתוצאה מכך, תעלות יוני סידן תלויות מתח נפתחות, ומאפשרות זרימה של יוני סידן. ריכוז סידן ציטוסולי מוגבר זה מגרה את שחרורם של הורמונים כמו אינסולין. בזמן אמת, כדי לדמות דינמיקה של סידן ציטוסולי, העבירו כמה איים עמוסים בצבע חיווי סידן מתאים בין דפנות הספייסר של רשת עדינה שהורכבה מראש.
מקמו את הרשת הפוכה על גבי כיסוי בתוך תא ההדמיה של מיקרוסקופ הפוך. מניחים רשת גסה ומשקל כדי לשתק את התאים. הוסף תמיסת הדמיה לתא. לאחר מכן, להגדיר מערכת זילוח כדי להציג גלוקוז או הורמון הבדיקה של עניין. בתוך התאים, מדדי סידן פלואורסצנטי טעונים מראש מדווחים על כל עלייה בריכוזי הסידן הציטוסולי. עם קשירה ליוני סידן, מולקולות האינדיקטור מציגות עלייה משמעותית בפליטה פלואורסצנטית. בפרוטוקול הבא נראה הדמיה בזמן אמת של דינמיקת סידן באיי לבלב מורין בתגובה לזילוח גלוקוז.
- כדי לשתק את האיים לצורך הדמיה, הרכיבו תא הדמיה למיקרוסקופ הפוך והניחו בתוך התא כיסוי זכוכית. ודא שממשק תא הזכוכית אטום למים וודא שהכיסוי נמצא בהישג ידו של מטרת המיקרוסקופ. לאחר מכן, חתכו ריבועים בגודל 20X20 מילימטר של רשת עדינה וגסה והשתמשו בחתיכו
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים