בידוד איי הלבלב באמצעות זילוח Collagenase: שיטה אנזימטית לבידוד תאי איון הלבלב
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 7:21 דק׳ • April 30th, 2023
- תאי האילט בלבלב מייצרים הורמונים חיוניים המעורבים בתפקודים אנדוקריניים. כדי לבודד איונים, ראשית, אבטחו עכבר שעבר המתת חסד וחשפו בניתוח את חלל הבטן שלו. הברישו הצידה את הכבד והמעיים כדי לאתר ולהדק את צינור המרה המשותף. זהה את האמפולה של Vater, הצינור שנוצר על ידי איחוד של הלבלב צינורות מרה נפוצים.
לאחר מכן, הזריקו תמיסת אנזים קולגנאז לצינור המרה הנפוץ. הזרימה האחורית מהצינור מנפחת בהצלחה את הלבלב, ומקלה על דיסוציאציה הנגרמת על ידי collagenase של רקמות הלבלב. הבלו את הלבלב לתוך צינור המכיל יותר פתרון collagenase. קוצצים באופן מכני את הרקמה ודוגרים כדי לסייע לעיכול הרקמה על ידי הקולגנאז.
לאחר קבלת תרחיף הומוגני, לעצור את העיכול האנזימטי על ידי הוספת תמיסה המכילה חלבונים המעכבים את פעילות collagenase. צנטריפוגה לאיסוף כדורית רקמה. השהה מחדש את הגלולה בתווך שיפוע צפיפות מתאים, שכב מעליה חיץ מתאים וצנטריפוגה ליצירת שכבות מעבר צבע.
אספו איים מהשכבה שנוצרה בין מדיום שיפוע הצפיפות לבין החיץ. לבסוף, בחרו איים בריאים לטיפוח. בפרוטוקול הבא נדגים בידוד של איי לבלב מורין על ידי מתן קולגן ואחריו צנטריפוגה הדרגתית של צפיפות.
- התחל על ידי הדבקת הגפיים של העכבר במצב שכיבה וריסוס הגוף עם 70% אתנול. בעזרת מלקחיים מזכוכית כיסוי ומספריים כירורגיים מעוקלים, יש לבצע חתך אופקי בעור הבטן בקוטר של כ-3 ס"מ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים