צביעה אימונופלואורסצנטית של ספרואידים: טכניקה לניתוח ספרואידים לביטוי ביטוי אנטיגן תוך תאי וחוץ-תאי

- ספרואידים הם מודלים תלת ממדיים של תרביות תאים במבחנה. עבור צביעה immunofluorescent, הראשון, ליצור תרבית spheroid של סוג התא הנדרש בצלחת multiwell. באמצעות מיקרופיפטה עם קצה פתח רחב, לאסוף את הספרואידים, תוך הקפדה על מניעת קרע עקב כוחות גזירה.

לאחר מכן, לתקן ולחדור את הספרואידים כדי להפוך תאים בודדים חדירים. כעת, דגרו עם תמיסה המכילה חלבונים כדי לחסום אתרי אינטראקציה לא ספציפיים של חלבונים על פני התא. טפלו בכדורידים עם קוקטייל נוגדנים ראשוני רצוי. דגירה כדי שהנוגדנים ייקשרו למולקולות המטרה שעל פני התא.

לאחר מכן, תייגו את הספרואידים בתמיסת נוגדנים משנית עם תווית פלואורסצנטית ספציפית לנוגדנים הראשוניים. לבסוף, טפלו בכדורידים עם צבע פלואורסצנטי מתאים קושר DNA כדי להכתים את גרעיני התא. באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי סורק לייזר, צלם חתכים אופטיים מרובים של הספרואיד במישורים אופטיים שונים.

התמונות שצולמו משקפות גרעינים בעלי תווית ניאון ואנטיגנים מעניינים. מזג את הערימות באמצעות תוכנה רלוונטית כדי לקבל את התמונה הסופית מרוכבת של spheroid 3D. בפרוטוקול הבא, נבצע צביעה אימונופלואורסצנטית של ספרואידים של פיברובלסטים בלבלב ופיברובלסטים הקשורים לסרטן בתרבית בנוכחות ממריץ, TGF בטא 1.

- ראשית, חתכו קצה פיפטה כדי להגדיל את הפתח. לאחר השלמת הדגירה, השתמש בקצה פיפטה חתוך זה כדי לאסוף את הספרואידים