אלקטרופורציה בלתי הפיכה: טכניקה לטיפול בגידול לבלב בעכבר

- אלקטרופורציה בלתי הפיכה או IRE היא טכניקה לבלימת גידולי לבלב על ידי מתן פולסים קצרים במתח גבוה של זרם חשמלי לגידול, תוך גרימת נזק בלתי הפיך לתאי הגידול. IRE בעל סלקטיביות גבוהה ונגישות לאזור הגידול המטרה. הוא אינו גורם נזק הנגרם מחום לתאים הבריאים הסמוכים, מה שהופך אותו לטיפול אנטי-סרטני מבטיח.

התחל על ידי הנחת עכבר מורדם בצד לנתח את חלל הבטן שלה כדי לאתר את הגידול על פני השטח של הלבלב. לאחר מכן, השתמש באלקטרודות, סוגר את אתר הגידול, ולנהל פולסים ממוקדים של זרם חשמלי למשך הזמן הרצוי. הזרם החשמלי מעבר לסף מסוים, גורם לנקבוביות קבועות בקרום התא של תאי הגידול, ומונע מהתא לחזור למצב של הומאוסטזיס.

נקבוביות אלה גורמות לתוכן התוך-תאי של התא לצאת החוצה, ולכן מובילות למוות תאי הדרגתי על ידי אפופטוזיס. עכשיו, לסגור את חלל הבטן ולהשאיר את העכבר להתאושש בכלוב הביתי. לבסוף, לפקח על הלבלב עבור הפחתת גודל הגידול, לאחר electroporation. בפרוטוקול הבא נדגים שיטה לביצוע אלקטרופורציה בלתי הפיכה לשיבוש גידולי הלבלב של עכברים.

- לפני שהגידול מגיע לקוטר של 6 מילימטרים, הניחו את בעל החיים המרדים על צדו הימני כדי לאפשר גישה לגידול והשתמשו בקוצץ ובמטוש אלכוהול כדי לנקות את אתר הגידול. באמצעות מלקחיים, מרימים את העור ישירות מתחת לגידול ומחדירים שתי אלקטרודות מערך מחטים דרך העור, במקביל לגוף כדי לבלום את הגידול, תוך הקפדה שהאלקטרודות לא יחדרו לחלל הצפק.

הגדר את האלקטרופורטור לספק פולסים של 100 מיקרו-שניות, בתדר של 1 הרץ, ב- 1,500 וולט לסנטימטר ובסך הכל 150 פולסים והשתמש בדוושת הרגל כדי להעביר את הפולסים, תוך הפרדת כל סט של 10 פולסים ב- 10 שניות כדי לאפשר פיזור חום בין כל קבוצת פולסים.

- כאשר עוויתות שרירים מתרחשות במהלך מסירת IRE ובולטות יותר במהלך קבוצת הפולסים הראשונית, ודא שהאלקטרודות עדיין נמצאות במיקום הרצוי וכי בעל החיים עדיין מורדם לאחר כל קבוצה של פולסים.

- לאחר לא יותר מ-200 שניות של מינון, הסר את האלקטרודות ורשום את המתח בפועל כפי שמוצג על האלקטרופורטור. לאחר מכן, החזר את העכבר לכלוב שלו. עבור IRE של גידול אורתוטופי, 8 עד 10 ימים לאחר השתלת הגידול, השתמש במלקחיים קהים באף כדי להחצין את הגידול עם המלקחיים, וללכוד את הגידול בחוזקה עם אלקטרודות הפלטינה של הטוויטר.

ספק את פולסי האלקטרופורציה כפי שהודגם זה עתה, תוך שמירה על הגידול חיצוני עבור קבוצת הפולסים האחרונה למשך 60 שניות לפחות כדי לפקח על כל סימני דימום. לאחר מכן, להחזיר את הגידול לחלל הבטן ולסגור את החתך כפי שהודגם, מעקב אחר החיה עד שהוא התאושש לחלוטין.