אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 5:08 דק׳ • April 30th, 2023
- תאים סרטניים המבטאים חלבון פלואורסצנטי ירוק או GFP מאפשרים מעקב אחר צמיחת הגידול וגרורות באמצעות הדמיה אופטית לא פולשנית. בדרך כלל אנו משתילים תאים אלה במודל אורתוטופי, המאפשר יצירה מחדש של המיקרו-סביבה של הגידול ומחקה את האינטראקציה של תאי הגידול עם סביבתם.
התחל על ידי הנחת עכבר מורדם על כרית חימום חם. כעת, הכניסו את אפו למסכת אף כדי לספק חמצן ואיזופלורן, חומר הרדמה. באמצעות מספריים, לעשות חתך קטן לחתוך את הרקמה. משכו בעדינות את הטחול יחד עם הלבלב ואתרו את זנב הלבלב.
לטעון מזרק עם תאים סרטניים פלואורסצנטי תרחיף להזריק אותו בעדינות לתוך זנב הלבלב. במקום ההזרקה מופיעה בועה שטחית המאשרת השתלה מוצלחת. החזירו את האיברים לחלל הגוף והשתמשו בתפר סטרילי כדי לסגור את החתך. עכשיו, להחזיר את העכבר לכלוב ולפקח עליו עד ההתאוששות.
לאחר משך הזמן הרצוי, מקם את העכבר בתא הדמיה וצלם תמונות. קרן האור פוגעת בתאים הסרטניים ומעוררת את ה-GFP, שבתורו מייצר פלואורסצנטיות ירוקה. בפרוטוקול הבא נבצע השתלה כירורגית של תאי סרטן לבלב המבטאים GFP במודל עכבר מורין אורתוטופי.
כדי להשתיל את התאים, ראשית, יש למרוח משחה על עיניו של עכבר מורדם ולהניח את בעל החיים על כרית חימום מכוסה בשפכטל סטרילי. לאחר מכן, לחטא בעדינות את האגף של החיה עם שלושה פילינג יוד ואחריו שלוש שטיפות אתנול 70%. לאחר אישור חוסר תגובה לצביטת הבוהן, טען כ -200 מיקרוליטר של התאים המוכנים לתוך מזרק 1 מיליליטר שחפת מקורר מראש המצויד במחט 18 מד.
החלף את מחט 18 המד במחט מד 27 והחזיר את התאים לקרח. לאחר מכן, אתר את האזור הכללי של הטחול ברביע השמאלי העליון של הבטן. בעזרת מלקחיים, צובטים את העור מעל הטחול ומבצעים חתך של כסנטימטר ליצירת כיס. לאחר מכן, צבטו את השריר החלק על גבי הטחול וחתכו דרך הרקמה כדי לגשת לחלל הצפק.
לאחר מכן, לתפוס בעדינות את הקצה הקאודלי של הטחול ולמשוך אותו מתוך חלל הגוף. בעזרת צמר גפן סטרילי רטוב, מורחים את הלבלב המחובר לקצה הטחול כדי לאתר את זנב הלבלב. לספק 50 מיקרוליטר של התאים לתוך זנב הלבלב. לאחר מכן, לאט לסובב את המחט מתוך הלבלב.
השתלה מוצלחת תיראה כמו בועה שטחית ללא דליפות. להחזיר את האיברים לחלל הצפק ולהקיף הכל עם השריר והעור. לאחר מכן, השתמש בתפר 6-0 כדי לסגור את החתך. לאחר מכן, להזריק את החיות עם ketoprofen ולפקח עליהם עד שהם התאוששו לחלוטין. בנקודת הזמן הניסויית המתאימה, השתמש במערכת מסחרית לצילום בעלי חיים קטנים כדי לדמות את הגידול בחיה החיה תחת הרדמה ובחר את מסנני העירור והפליטה המתאימים.
לאחר מכן, קבל תמונה ראשונית באמצעות אור לבן בלבד. שמירה על החיה באותו מיקום, לעבור מסננים GFP ולרכוש תמונה שנייה. כדי לנתח את צמיחת הגידול, הניחו את התמונות הלבנות והפלואורסצנטיות כדי להעריך את האזור הפלואורסצנטי ואת עוצמת תאי הגידול.