JoVE Encyclopedia of Experiments
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:14 דק' • April 30th, 2023
- תאי גזע סרטניים בלבלב או CSCs הם תת-קבוצה של תאי סרטן המתחדשים מעצמם ויכולים לגרום לגידול כולו. CSCs שוכנים בנישה מוגנת היטב המורכבת מתאים אחרים, כגון פיברובלסטים, תאי חיסון, תאי אנדותל ורכיבי מטריצה חוץ-תאיים, כגון ציטוקינים וגורמי גדילה. האינטראקציות המתרחשות בין התאים בסביבה כזו מסייעות ל-CSCs להתפשט ולהגביר את צמיחת הגידול.
כדי לחקור את המאפיינים של CSCs, אנו מבודדים אותם מגידולי הלבלב. התחל על ידי לקיחת תרחיף התא מרקמת גידול הלבלב האנושי במצע גידול CSC. לאחר מכן, זרעו את התרחיף, המורכב בעיקר מפיברובלסטים ו- CSC, על צלחת מצופה ג'לטין ודגרו עליו למשך הזמן הרצוי. פיברובלסטים נצמדים למשטח הג'לטין, ומשאירים את CSCs הצפים בחופשיות בתרחיף התא.
קחו כמות קטנה של תרחיף תאים והוסיפו טריפאן כחול. פיפטה תערובת זו להמוציטומטר ולספור את מספר התאים קיימא. כחול טריפאן נכנס לתאים המתים ומכתים אותם בכחול ומשאיר את התאים החיים חסרי צבע. לבסוף, אחסן את CSC לניתוח נוסף.
בפרוטוקול הבא נבודד את ה-CSC מגידולי הלבלב.
- כדי לבודד תאי גזע סרטניים מאדנוקרצינומה של צינור הלבלב בארון בטיחות ביולוגית סטרילי, השתמש באזמל סטרילי ומלקחיים כדי לטחון את הגידול האנושי בצלחת תרבית בגודל 60X15 מילימטר המכילה מיליליטר אחד של PBS סטרילי, והוסף עוד שלושה עד ארבעה מיליליטר PBS לפי הצורך, עד לניתוק מוחלט של הרקמה.
מעבירים את מתלה הרקמה לתוך צינור חרוטי סטרילי ומוסיפים PBS לנפח סופי של חמישה מיליליטר. לאחר מכן, הומוגניזציה מכנית של הדגימה עם הדיסוציאטור, הצנטריפוגה, ועיכול הרקמה ההומוגנית עם collagenase ב 37 מעלות צלזיוס.
לאחר שעה, צנטריפוגה את התאים, resuspending את הגלולה ב 10 מיליליטר של מדיום מלא. מסננים את תרחיף התא דרך מסננת של 40 מיקרומטר ומסובבים את התאים שוב, הפעם משעים מחדש את הגלולה בחמישה מיליליטר ACK.
לאחר חמש דקות בטמפרטורת החדר, הסר את חיץ הליזה של תאי הדם האדומים על ידי צנטריפוגה והשהה מחדש את הגלולה בתווך תאי גזע סרטניים. לאחר מכן, דגרו על התאים על צלחת מצופה ג'לטין בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס כדי להסיר את רוב תאי הפיברובלסט המתחברים במהירות. לאחר שעה, לשחזר את supernatant ולכמת את מספר תאי סרטן הלבלב קיימא.