אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:50 דק׳ • April 30th, 2023
- מיני חמצן תגובתי מיוצרים בעיקר מהמיטוכונדריה כאשר אלקטרונים דולפים החוצה משרשרת הובלת האלקטרונים. אלקטרונים אלה משתלבים עם חמצן מולקולרי ויוצרים מיני חמצן תגובתי שונים, או ROS. בתאים סרטניים יש ייצור יתר של מיני חמצן תגובתי. מולקולות ROS תגובתיות מאוד אלה יכולות לפגוע באופן חמצוני בממברנות, בחלבונים ובדנ"א בתוך התא.
רמות מוגברות של ROS פוגעות בדנ"א ומובילות להפעלת מסלול איתות אונקוגן הגורם להתקדמות הסרטן. לכן, חיוני לזהות את רמות מיני החמצן הריאקטיביים המיוצרים על ידי התאים הסרטניים.
התחל על ידי לקיחת תאים סרטניים מסרטן המעי הגס האנושי במדיה תרבית מתאימה. לאחר מכן, זרעו תאים אלה לצלחת מרובת בארות והוסיפו תמיסת DCFH-DA. דוגרים על הצלחת למשך הזמן הרצוי. DCFH-DA חוצה את קרום התא. ברגע שהוא נכנס לתא, DCFH-DA הופך ל-DCFH בנוכחות אנזים אסטראז תאי. יתר על כן, חמצון DCFH על ידי מיני חמצן תגובתי מניב מולקולות פלואורסצנטיות ירוקות.
התבוננו בתאים תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי. עוצמת הפלואורסצנטיות הירוקה מצביעה על רמת מיני החמצן הריאקטיביים בתא. בפרוטוקול הבא, אנו משתמשים בצבע DCFH-DA כדי להכתים מיני חמצן תגובתי בתאי סרטן המעי הגס.
- כדי להכתים את התאים, להסיר את המדיום המכיל תרופה ולשטוף אותם פעם אחת עם DMEM. הוסף 500 מיקרוליטר של פתרון עבודה DCFH-DA לכל באר ודגר על הצלחת ב 37 מעלות צלזיוס במש
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים