אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:19 דק׳ • April 30th, 2023
- בלוטות הלימפה, או LNs, מספקות מיקרו-סביבה לצמיחת הגידול בשל תאי הסטרומה הקיימים ב- LNs. תאים דנדריטיים פוליקולריים, או FDCs, הם הסוגים הנפוצים ביותר של תאי סטרומה המשחררים כימוקינים, ציטוקינים וגורמי גדילה, המקיימים אינטראקציה עם תאי גזע של סרטן המעי הגס ומגבירים את צמיחת הגידול.
FDCs גם לקדם גרורות extranodal של סרטן המעי הגס לאיברים כגון הריאות והכבד. כדי לחקור את התקדמות סרטן המעי הגס, אנו משתילים תאי סרטן שמקורם בגידול באיבר, אשר מתאים להיסטוטיפ הגידול במודל עכבר מדוכא חיסון המכונה קסנוגרפט אורתוטופי הנגזר מהמטופל, או PDOX.
התחל על ידי אבטחת עכבר מורדם במצב שכיבה על לוח דיסקציה באמצעות סרט מעבדה. כעת, ערבבו כמות נדרשת של תאי סרטן המעי הגס והחלחולת המתויגים בלוציפראז ו-FDCs בצינור. קח את ההשעיה המתקבלת מזרק. לאחר מכן, אתר את הפתח האנאלי של העכבר והזריק את תערובת סרטן המעי הגס מוכן לתוך השכבה submucosal של פי הטבעת.
כדי לצפות בעומס גרורתי, הזריקו לוציפרין תוך צפקית מדי שבוע ודמיינו את העכבר באמצעות הדמיה ביולומינסנטית. בנוכחות אנזים לוציפראז ו- ATP, לוציפרין בתאי סרטן הופך לאוקסילוציפרין, פולט אור כחול-ירוק. בפרוטוקול הבא, ניצור מודל עכבר קסנוגרפט אורתוטופי לחקר התקדמות סרטן המעי הגס.
- כדי ליצור מודל עכבר CRC, הניחו עכבר NOD SCID זכר מורדם בן שישה עד שמונה שבועות במצב שכיבה מתחת למיקרוסקופ מנתח, והדביקו את החוטם לקונוס אף איזופלורני ואת הגפיים הקדמיות באמצעות סרט דבק ליציבות. הניחו חפץ קטן, כגון קטע גזה קטן, מתחת לבסיס הזנב, והגביהו את פי הטבעת כדי לשפר את הראות והזווית. השתמשו במלקחיים מעוקלים, משומנים וקהים כדי להרחיב את התעלה האנאלית ולחשוף את רירית פי הטבעת ופי הטבעת הדיסטליים ולהסיר צואה.
חבר מחט סטרילית נשלפת 30 מד מזרק זכוכית 50 מיקרוליטר. ציירו 10 מיקרוליטר של גידול ותרחיף תאי HK שהוכנו בשלבים קודמים לתוך המזרק. הזריקו את 10 המיקרוליטרים לתת-רירית הרקטלית האחורית הדיסטלית, 1 עד 2 מילימטרים מעל התעלה האנאלית, תוך הקפדה שלא לעבור לחלל האגן. לבסוף, הסר את העכבר מחרוט האף איזופלורן והתבונן בו במשך שעה לאחר ההליך לסימני מצוקה.