בידוד דנ"א מיקרוביאלי בצואה: חקר השפעת העשרה סביבתית על מגוון המיקרוביום במודל הגידול המורין

0 views • 3:46 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- העשרה סביבתית, או EE, מתייחסת לשינויים בפרמטרים של הדיור כדי להשיג השפעות מועילות על מחלות שונות כגון סרטן. בעכבר הנושא גידול, EE מפעיל את מערכת החיסון ומפחית דלקת, מה שבסופו של דבר משפר את המיקרוביוטה של המעי ומשפר את שיעור ההישרדות. כדי לחקור את השינויים במיקרוביוטה של המעי, הוסיפו את הכמות הרצויה של חיץ ליזה בצואה בצינור המכיל את שרפרף העכבר.

צנטריפוגות את הדגימה ומעבירים את הסופרנאטנט לצינור מיקרוצנטריפוגה טרי. הוסף גואנידיניום כלוריד ליזיס חיץ כי denatures DNase ו RNase. לאחר מכן, מוסיפים אתנול ומעבירים את הדגימה לעמודת ספין סיליקה.

אתנול מסייע לדנ"א להיקשר לסיליקה. צנטריפוגה את הדגימה. כעת, העבירו את העמודה לצינור מיקרוצנטריפוגה טרי והוסיפו חיץ אלוציה לטור כדי ללוטש DNA.

צנטריפוגו את הדגימה והשליכו את העמודה. העבר את הדגימה לתוך צינור PCR והפעל PCR כדי להגביר את ה- DNA. טען את ה- DNA על ג'ל אגרוז ובצע אלקטרופורזה כדי לכמת את גודל ה- DNA המיקרוביאלי. בפרוטוקול הבא נבודד דנ"א מצואה כדי לנתח את השפעת EE על מיקרוביוטה של המעי הגס בעכבר הגידולי.

- השתמש בערכה מסחרית כדי לבודד DNA מיקרוביאלי מהצואה בעקבות פרוטוקול זיהוי פתוגן בצואה. כאשר עושים זאת, מעבירים את הדגימות מהמקפיא מינוס 80 מעלות צלזיוס על קרח יבש ושוקלים אותן. לאחר מכן, הגדר PCR שמגביר את הדנ"א המיקרוביאלי כמתואר בפרוטוקול הטקסט. לאחר מכן, נקו את מוצרי התגובה באמצעות חרוזים מגנטיים.

לצורך הניקוי, ראשית, צנטריפוגו לזמן קצר את לוחית ה-PCR האמפליקון כדי למשוך את תוצרי התגובה. לאחר מכן, מערבלים את החרוזים המגנטיים כדי לפזר אותם באופן שווה ולהעביר 20 מיקרוליטר aliquots לכל תגובה היטב. מערבבים היטב את החרוזים עם התמיסה על ידי פיפטוף כל הנפח לאט 10 פעמים. לאחר מכן, תן לחרוזים להסתפק במשך 5 דקות.

לאחר מכן, הניחו את לוחית ה-PCR על מעמד מגנטי והמתינו 2 דקות עד שהסופרנאטנטים יתנקו בעקבות איסוף מגנטי של חרוזים. לאחר מכן, הסר והשלך את supernatants. לאחר מכן, כאשר הצלחת עדיין על המגנט, ממלאים כל באר חרוזים ב -200 מיקרוליטר של אתנול טרי 80 אחוז וממתינים 30 שניות. לאחר מכן, בזהירות להסיר את supernatant.

חזרו על שלב השטיפה פעם אחת ותנו לחרוזים להתייבש באוויר במשך 10 דקות. כעת, הוציאו את תוצרי התגובה מהחרוזים על ידי הסרת הצלחת מהמעמד המגנטי והוספת 52.5 מיקרוליטר של טריס לכל באר. מערבבים לחלוטין את החרוזים לתמיסה על ידי פיפטינג איטי של כל עוצמת הקול 10 פעמים. לאחר מכן, אספו את החרוזים על המעמד המגנטי כמו קודם והעבירו 50 מיקרוליטר של supernatants לצלחת PCR נקייה. מכסים את הצלחת בדבק שקוף ומאחסנים במינוס 20 מעלות צלזיוס עד שבוע.

06:50

השימוש בתיבת פאזל כאמצעי להערכת היעילות של הסביבה העשרה

Related Videos

0 Views

09:30

פרוטוקול לעכברי שיכון בסביבה מועשרת

Related Videos

0 Views

07:02

מתן העשרה סביבתיים משמעותיים ומדידת הרוק קורטיזול בחזירים שוכנו על ריצוף סלטד

Related Videos

0 Views

09:01

הערכה לא פולשנית של היעילות של ניו Therapeutics למעי פתולוגיות שימוש הדמיה אנדוסקופי סידורי של עכברים חיים

Related Videos

0 Views

08:14

שיטה כדי להגדיר את ההשפעות של העשרה סביבתית על המגוון הביולוגי Microbiome המעי הגס במודל של עכברים המעי הגס גידול

Related Videos

0 Views

08:32

העשרה ואפיון של Microenvironments המערכת החיסונית והחיסון של הגידול הוקמה גידולים מאתר תת עורית

Related Videos

0 Views

11:22

אנליזה microbiota באמצעות שני שלבים PCR ו-הדור הבא של 16 rRNA גן רצף

Related Videos

0 Views

05:28

ניתוח הדינמיקה של מיקרוביוטה בצואה בעכברים המועדים לזאבת באמצעות שיטת בידוד דנ"א פשוטה וחסכונית

Related Videos

0 Views

07:32

בידוד צואה מורין והשתלת מיקרוביוטה

Related Videos

0 Views

07:45

הכנה ותחזוקה של ניסוי כלוב איזופוזיטיבי להדרה ביולוגית להשתלת צואה אנושית בעכברים נטולי חיידקים

Related Videos

0 Views

Last updated: 25 July 2026