אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 4:55 דק׳ • April 30th, 2023
- אורגנואידים הם מבנים תאיים תלת-ממדיים במבחנה המתארגנים בעצמם כדי לחקות מאפייני רקמה מרכזיים של איבר מוצאם. כדי להתחיל בתיוג, טפלו באורגנואידים שנקטפו עם קוקטייל אנזימים מפרקי חלבון וקולגנוליטי כדי לנתק את התאים לתרחיף. צנטריפוגה להפרדת התאים מסופרנטנט המכיל אנזים. השליכו את הסופרנטנט. ממיסים את גלולת התא באמצעות תווך המכיל וקטורים לנטי-ויראליים. וירוסים רקומביננטיים אלה נושאים את רצף הקידוד של חלבון פלואורסצנטי ירוק או GFP.
הנגיפים מתמזגים עם התאים ומשחררים את החומר הגנטי שלהם ואנזימים נגיפיים מסוימים לתוך הציטופלסמה. התעתיק ההפוך הנגיפי מסנתז את הדנ"א הנגיפי המשלים שנע לתוך גרעין הפונדקאי. האינטגראז הנגיפי מסייע לשלב את הדנ"א הנגיפי המכיל רצף GFP בגנום המארח. גדל תאים מומרים אלה במטריצה חוץ-תאית או צלחת תרבית מצופה ECM. שאפו את התווך והצנטריפוגה לאסוף תאים שאינם מחוברים. השהה מחדש את התאים ב- ECM נוסף.
שכבו את ההשעיה על התרבית הדבקה כדי לקדם את כדאיות התא. לאחר שהמטריצה מתמצקת, מוסיפים מדיום תרבית ודגרים כדי להקל על היווצרות אורגנואידים. התבוננו בתרבית תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי. תאים מותמרים מסנתזים חלבונים פלואורסצנטיים ירוקים. אורגנואידים הנוצרים מתאים אלה מפגינים חיוביות GFP. הפרוטוקול הבא מדגים התמרה לנטיויראלית GFP לתאי אורגנואידים של סרטן המעי הגס שמקורם בחולה.
- לאחר 7 עד
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים