אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 2:57 דק׳ • April 30th, 2023
- התחילו בתרבית של חלבון פלואורסצנטי ירוק, או GFP, המבטא אורגנואידים של סרטן המעי הגס. קצרו את האורגנואידים. טפל בתמיסת אנזים לניתוק תאים כדי לנתק את האורגנואידים לתרחיף חד-תאי. צנטריפוגה להפרדת הסופרנטנט המכיל אנזים. הסר את supernatant. השהה מחדש את תאי סרטן המעי הגס המבטאים GFP באמצעות מטריצה חוץ-תאית מלאכותית המכילה מדיה. טען את תרחיף התא לתוך מזרק ותחזק אותו על קרח כדי למנוע התמצקות מטריצה בטמפרטורות הסביבה.
לאחר מכן, להכין עכבר מורדם במצב שכיבה. משוך בעדינות את השכבה הרירית של פי הטבעת דרך פתח פי הטבעת. כעת, הזריקו את תרחיף התאים הסרטניים המבטא GFP המוכן לתוך השכבה התת-רירית הרקטלית המכילה את רשת כלי הדם. אפשר לעכבר להתאושש.
תוך מספר ימים מתפתח במקום ההזרקה גידול ראשוני המבטא GFP. עם גרורות ספונטניות, תאי גידול אלה מתנתקים ונכנסים למחזור הדם. בסופו של דבר, התאים מתפשטים לאיברים מרוחקים ומתרבים ליצירת גידולים גרורתיים חיוביים ל-GFP. בפרוטוקול הבא נראה יצירת מודל עכבר גרורות ספונטני של סרטן המעי הגס על ידי הזרקה אורתוטופית של תאי אורגנואיד מעי גס המבטאים GFP.
- כדי לבסס מודל עכבר גרורות ספונטני של קסנוגרפטים סרטניים שמקורם בחולה CRC, יש לנתק את האורגנואידים המסומנים ב- GFP כפי שהודגם ולדלל את תרחיף תאי הגידול הבודדים ב- 5 כפול 10 לחמשת תאי הגידול לכל 50 מיקרוליטר PBS, בתוספת ריכוז מטריצה חוץ-תאית מלאכותית של 50%. לטעון 50 מיקרוליטר של תאים לכל עכבר לתוך מזרק מצויד מחט 22 מד ומניחים את תאי הגידול על קרח.
לאחר מכן, לאשר חוסר תגובה צביטת הבוהן ולהניח את עכבר NOG הראשון מורדם במצב שכיבה על ספסל המעבדה. באמצעות פינצטה סטרילית, למשוך בעדינות את רירית פי הטבעת מתוך פי הטבעת מיד להזריק את תאי הגידול לתוך תת רירית פי הטבעת.