JoVE Encyclopedia of Experiments
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:24 דק' • April 30th, 2023
- מיקרוגרורות הן קבוצה קטנה של תאים סרטניים הנושרים מגידול ראשוני ומתפשטים לחלקים שונים בגוף דרך דם או בלוטות לימפה. כדי לזהות מיקרוגרורות, יש להשעות תאי אורגנואיד של סרטן המעי הגס ב-PBS כדי לשמור על רמת החומציות ולטעון את תרחיף התאים לתוך מזרק. לאחר מכן, הניחו עכבר מורדם במצב נוטה על מיטת ניתוח. בצע חתך קטן באמצעות מספריים בחלק התחתון של האגף השמאלי ולחשוף את הטחול. משכו בעדינות את הטחול החוצה באמצעות פינצטה והזריקו באיטיות את תרחיף התא לתוך הטחול. סגרו את החתך באמצעות תפרים והחזירו את בעל החיים לכלוב שלו. עקוב אחריו עד שהוא מתאושש.
לאחר תקופת ההזרקה הרצויה, להקריב את העכבר כדי לנתח גידולים ראשוניים ורקמות שונות. צפו ברקמות מנותחות תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי. תאים סרטניים המבטאים GFP מפתחים גידול ראשוני באתר המוזרק בטחול. כמה תאים סרטניים מהגידול הראשוני עוברים לאיבר אחר, בדרך כלל הכבד, כדי ליצור מושבות מיקרוגרורתיות. בפרוטוקול הבא נבסס מודל ניסויי של גרורות בעכבר של תאי אורגנואיד סרטניים המבטאים GFP.
- כדי לבסס מודל ניסויי של גרורות שמקורן בחולי CRC, יש לדלל את תרחיף תאי הגידול הבודדים בריכוז של 4 כפול 10 עד לרביעי בריכוז של 50 מיקרוליטר ולהעמיס 50 מיקרוליטר תאים לעכבר לתוך מזרק המצויד במחט 22 מד. מניחים את עכבר NOG המורדם הראשון במצב נוטה על הספסל ומבצעים חתך קטן באזור התחתון של האגף השמאלי.
השתמשו במספריים סטריליים ובפינצטה כדי לחתוך בזהירות את הצפק ולחשוף את הטחול, והשתמשו בפינצטה כדי לתפוס את השומן המחובר לטחול. לאחר מכן, להזריק לאט 50 מיקרוליטר של תרחיף תאי הגידול לתוך הטחול, דואג כי לא דליפה הוא ציין.
לאחר שכל העכברים הוזרקו ונתפרו לפי הצורך, החזירו את בעלי החיים לכלובים הביתיים שלהם ובדקו אם יש דליפת תפרים וכדאיות יום לאחר מסירת תאי הגידול. השתמש בקליפרים כדי למדוד את הגידולים מדי שבוע, תוך קצירת הגידולים הראשוניים והרקמות הרלוונטיות עד לנקודות הקצה הניסיוניות המתאימות. העבירו את הגידולים והאיברים המנותחים ל-5 מיליליטר של PBS קר כקרח בצלוחית פטרי של 10 ס"מ על קרח והתבוננו ברקמות המנותחות תחת מיקרוסקופ סטריאו-פלואורסצנטי כדי להעריך את ביטוי ה-GFP שלהן.