אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 5:19 דק׳ • April 30th, 2023
- התחל בלקיחת עכבר מוטנטי מותנה מורדם עם גנום שונה הנושא רצפי זיהוי אנזימים ספציפיים של Cre-recombinase הנקראים LoxP תוספות המאגפות את הגן מדכא הגידול הרצוי להיות מוטציה. חושפים בניתוח את חלל הבטן. אתר את המעי הגס הדיסטלי ומהדק את חלקו העליון. מכניסים טרנסאנלית צינורית רפואית ומקדמים אותה לתוך המעי הגס הדיסטלי. יש לשטוף את המעי הגס במי מלח כדי להסיר כל חומר צואתי. החלף את הצינור. מהדקים את האזור התחתון של המעי הגס לצורך סגמנטציה. ניפוח המקטע באמצעות פתרון דיסוציאציה מתאים לתאים. זה מחורר את מחסום הרירית ומגביר את הנגישות של תאי קריפטה במעי. לשטוף את פתרון הדיסוציאציה.
לאחר מכן, להזריק השעיה adenoviral לתוך קטע המעי הגס. וקטורים נגיפיים מהונדסים אלה מקודדים אנזימי Cre-recombinase. הנגיף נכנס לתא, משחרר את הדנ"א שלו לגרעין ומבטא את האנזימים. החלבונים מזהים את תוספות LoxP בגנום המארח ומזרזים רקומבינציה ספציפית לאתר, ובכך משביתים את הגן מדכא הגידול. מוטציה זו של אובדן תפקוד מקדמת את התקדמות הסרטן. תפרו את החתך ואפשרו לעכבר להתאושש. לפקח כדי לבחון את הצמיחה של גידולים מעי גס מבודדים. הפרוטוקול הבא מראה יצירת מודל עכבר סרטן המעי הגס על ידי זיהום אדנו-קר סגמנטאלי.
- התחילו בהנחת עכבר מורדם במצב שכיבה ומרחו משחה על עיני החיה. הדביקו את העכבר במצב מאובטח ולאחר מכן אשרו את רמת ההרגעה המתאימה
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים