בידוד CTC מדגימת דם שלמה: שיטה להשגת CTCs ממודל סרטן המעי הגס מורין
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:50 דק׳ • April 30th, 2023
- תאי גידול במחזור הדם, או CTCs, הם התאים הסרטניים הנובעים מהגידול הראשוני ונכנסים למחזור הדם. רוב CTCs יכולים לשרוד בזרם הדם מבלי להיצמד לפני השטח; לכן, אנו יכולים לזהות אותם ישירות מהדם של רוב חולי הסרטן.
CTCs בדם יכולים להצביע על התפשטות הגידול בתוך הגוף, ולכן זיהויים מסייע להבין את התקדמות הסרטן. התחל על ידי לקיחת מודל עכבר סרטן המעי הגס מורדם ולקבל דם על ידי ניקוב לב. מעבירים את הדם לצינור חרוטי המכיל מדיום שיפוע צפיפות וצנטריפוגה להפרדת מרכיבי הדם.
השליכו את השכבה העליונה המכילה פלזמה ואספו את מקטע התא החד-גרעיני בדם ההיקפי, או PBMC, הנמצא בממשק בצינור נפרד. לאחר מכן, הוסיפו את הנוגדן נגד EpCAM לתאי PBMC והתבוננו תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי. CTCs במחזור מבטאים סמן תא המכונה מולקולת הידבקות תאי אפיתל או EpCAM. לכן, נוגדנים נגד EpCAM יכולים לסייע בזיהוי CTCs חיוביים ל-EpCAM.
אסוף את CTCs ואחסן אותם לניתוח נוסף במורד הזרם. בפרוטוקול הבא, נזהה את CTCs המבטאים EpCAM מחלק התא החד-גרעיני ההיקפי של הדם של מודל עכבר סרטן המעי הגס.
- כדי לבודד את תאי הגידול במחזור הדם בנקודת הקצה הניסויית המתאימה, מלא צינורות חרוטיים של 15 מיליליטר בתווך שיפוע צפיפות של 5 מיליליטר לכל צינור והעבר בזהירות דגימות דם שלמות שנאספו מבעלי חיים נושאי גידול לשכבות שיפוע הצפיפות.
להפריד את התאים על ידי צנטריפוגה
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים