מיקרודיסקציה בלייזר: טכניקה לבידוד תאי סרטן מעי גס פולשים ממודל תרבית אורגנוטיפית תלת-ממדית

- מודלים אורגנוטיפיים תלת-ממדיים של סרטן המעי הגס הם תרביות in-vitro שהונדסו כדי לחקות מיקרו-סביבות גידול in-vivo. התרבית מכילה לעתים קרובות תאי סטרומה, כמו פיברובלסטים, שגודלו בתרבית משותפת עם תאי אפיתל של סרטן המעי הגס, במיקרו-סביבה חוץ-תאית מתאימה.

בתרביות מבוססות, תאים סרטניים בעלי פוטנציאל גרורתי פולשים למטריצה החוץ תאית. כדי לבודד תאים פולשים אלה, ראשית, טפלו במודל האורגנוטיפי עם פורמלדהיד כדי לקבע תאים ומטריצות חוץ-תאיות. לדגור עם אלכוהול כדי לייבש את הדגימה.

לאחר מכן, הטמע בשעוות פרפין נוזלית כדי ליצור בלוק רקמות. השתמש אולטרה מיקרוטום כדי לקבל חלקים פרוסים דק. הרכיבו את המקטעים על מגלשת זכוכית מתאימה.

הוסף קסילן כדי deparaffinize את הסעיפים. ברצף, לדגור על החלקים בריכוזים יורדים של אתנול כדי להחזיר דגימות.

טפל עם Cresyl Violet כדי להכתים ולהבדיל תאים סרטניים המעי הגס מן microenvironment. הניחו את מגלשת הוויטראז'ים עם הפנים כלפי מטה על במת המיקרוסקופ. באמצעות תוכנה מתאימה, זהה את התאים שיש לנתח במיקרו ותחם את הגבולות. הפעל את הלייזר כדי לחתוך את החלק המודגש ולאסוף את החלק המנותח

.

בפרוטוקול הבא נראה בידוד של תאי סרטן המעי הגס ממודל תרבית משותפת אורגנוטיפית תלת-ממדית באמצעות מיקרודיסקציה בלייזר.

- מוציאים את כל היריעה האורגנוטיפית, כולל הניילון, מהבאר ומניחים אותה על סרט נצמד