אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 2:44 דק׳ • April 30th, 2023
- תאים מייצרים כוחות מכניים הפועלים על מטריצה חוץ-תאית. כוח זה נקרא כוח משיכה. תאים מפעילים כוחות משיכה כדי לבצע משימות שונות כגון הגירה והתפשטות.
תאי סרטן גרורתיים מפעילים כוחות משיכה גדולים יותר מתאים בריאים; לכן, אנו מבצעים בדיקת ציטומטריית מתיחה כדי למדוד את כוחות המתיחה המופעלים על ידי תאים על מצעים אלסטיים. התחילו בזריעת הכמות הרצויה של תאי סרטן המעי הגס על הידרוג'ל פוליאקרילאמיד, ג'ל המחקה ECM במבחנה. הג'ל מורכב מחלבוני פיברונקטין המסייעים לתאים להיצמד לפני השטח, וחרוזים פלואורסצנטיים, המשמשים סמן לשינויי מיקום.
לדגור על התאים לתקופה הרצויה. התאים נצמדים לג'ל ומפעילים את כוח המתיחה, הגורם לתזוזה של החרוזים הפלואורסצנטיים. כעת, הניחו את הצלחת מתחת למיקרוסקופ פלואורסצנטי וצלמו את החרוזים הפלואורסצנטיים שנעקרו. לאחר מכן, הוסף את הכמות הרצויה של טריפסין לצלחת כדי לנתק את התאים ולנתח את כוח המתיחה המופעל על ידי התאים באמצעות תוכנה מתאימה. בפרוטוקול הבא נבצע בדיקת מיקרוסקופ כוח מתיחה לניתוח המתיחה התאית של תאי סרטן המעי הגס האנושי.
- לביצוע בדיקת מיקרוסקופ כוח המתיחה, ראשית, יש לחמם את תמיסת 0.25% טריפסין-EDTA 10% SDS לטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באמבט מים למשך 10 דקות לפני תחילת ניסוי המתיחה. מוציאים ג'ל אחד בכל פעם מאינקובטור תרבית התאים ומניחים על במת המיקרוסקופ. לאחר מציאת תא
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים