אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:25 דק׳ • April 30th, 2023
- מורפולוגיית המצע משפיעה מאוד על התנהגות התאים הסרטניים ועל תגובות גרורתיות. רשת דינמית של שלד אקטין מספקת תמיכה מבנית לתאים ומתווכת את התנועה התאית. קומפלקסים חלבוניים גדולים הקשורים לממברנה הנקראים הידבקויות מוקדיות מחברים את השלד הציטו-תאי עם המטריצה החוץ תאית, ומסייעים להתפשטות תאים.
כדי להתחיל להכתים, לקחת תרבית תאים סרטניים, ולטפל בהם עם paraformaldehyde כדי לתקן ולחדור את התאים. כעת, לדגור על התאים עם מגיב משפר אותות המכיל חלבונים כדי להכין את התאים כדי להפחית את צביעת הרקע. הוסף נוגדנים ראשוניים אנטי וינקולין הנקשרים לוינקולין, אחד החלבונים בתוך קומפלקס ההיצמדות המוקדית.
לאחר מכן, לדגור על הדגימה עם נוגדן משני מצומד בצבע פלואורסצנטי המכוון לנוגדן הראשוני. לבסוף, טפל בתאים עם צימודים פלואורסצנטיים מתויגים phalloidin כי להיקשר באופן סלקטיבי חוטי אקטין של השלד cytoskeleton. התבונן בתאים תחת מיקרוסקופ סריקת לייזר קונפוקלי כדי לחקור את האותות הפלואורסצנטיים שלהם.
תאים בעלי מורפולוגיה מפוזרת היטב מציגים סיבי אקטין מוגדרים ומציגים הידבקויות מוקדיות מובחנות ומוארכות המכילות וינקולין. לעומת זאת, תאים בעלי פיזור גרוע אינם בעלי חוטי אקטין מוגדרים, אך מציגים הידבקויות מוקדיות המכילות וינקולין. בפרוטוקול הבא, נדגים בדיקת immunofluorescence לחקר שלד ציטו-שלד וארגון הידבקות מוקדית בתאי ס
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים