בידוד תאי גזע מלנומה: שיטה להשגת תאי מלנומה חיוביים ושליליים CD133 באמצעות מיון תאים המופעלים מגנטית
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 5:40 דק׳ • April 30th, 2023
- מלנומה מכילה תת-אוכלוסייה קטנה של תאי גזע סרטניים בעלי יכולות התחדשות עצמית והתחלת גידול. CD133 או Prominin-1, גליקופרוטאין טרנסממברנה מחומש, הוא אחד הסמנים העיקריים המבוטאים על ידי תאי גזע סרטן מלנומה גרורתיים. כדי לבודד תאים חיוביים CD133, התחל עם השעיה של תאי מלנומה ראשוניים במאגר מתאים.
דגירה עם מגיב חוסם המכיל חלבונים החוסמים אתרי קישור לא ספציפיים על פני התא. לטפל בתאים עם נוגדנים ראשוניים CD133 biotinylated. נוגדנים אלה נקשרים לאנטיגנים CD133 המתבטאים בתאים חיוביים ל- CD133. כעת, הוסיפו מיקרו-כדוריות מגנטיות נגד ביוטין לתרחיף. דגרו כדי שהמיקרו-כדוריות ייקשרו לתאים המסומנים בביוטין.
לבסוף, העבירו את המתלה המוגר דרך עמוד הממוקם בשדה מגנטי. עם השפעה מגנטית, כל התאים החיוביים CD133 המסומנים עם microbeads להידבק לעמודה, בעוד התאים ללא תווית לעבור דרך. אסוף תאים שליליים אלה ללא תווית CD133. הסר את העמודה מהשדה המגנטי. יש לשטוף את התוכן באמצעות מאגר מתאים כדי לנטרל ולאסוף תאים חיוביים ל-CD133.
בפרוטוקול הבא נראה בידוד של תאי גזע סרטניים חיוביים ושליליים ל-CD133 מתרבית של מלנומה ראשונית המתקבלת מרקמת הגידול. יש לשטוף 80% תאים חוממים עם PBS שחומם מראש. מוסיפים כמות מתאימה של Accutase ודגרים עד שהתאים מתנתקים מפני השטח של התרבית. קצרו את התאים בתווך קוונטי 263 והעבירו לצינור של 50 מ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים