רקומביננטי תא פוליומה פוליומה וירוס (MCPyV) הכנת ויריון: טכניקה לייצור טיטר גבוה רקומביננטי MCPyV Virion
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 5:53 דק׳ • April 30th, 2023
- Merkel cell polyomavirus, או MCPyV, הוא אונקו DNA דו-גדילי בעל גנום מעגלי הגורם לקרצינומה של תאי מרקל, סוג של סרטן העור. כדי להכין נגיפים מסוג MCPyV, ראשית, יש לטפל בתרבית דבקה של תאי אריזה באמצעות קוקטייל המכיל חומר טרנספקציה, הגנום הנגיפי, ושני פלסמידים המקודדים חלבוני ביטוי הדרושים לקידום שכפול נגיפי.
במהלך הדגירה, מגיב transfection יוצר lypoplexes עם פלסמידים, להקל על המסירה שלהם לתוך תאי האריזה. ברגע שהוא בתוך הגרעין, מנגנון התא מאפשר ביטוי של הגנום הנגיפי והפלסמיד. הביטוי פלסמידים מקודדים חלבוני אנטיגן של גידול גדול ואנטיגן של גידול קטן. חלבונים אלה עוברים טרנסלוקציה לגרעין ומניעים שכפול DNA נגיפי. לאחר מכן, הגנום הנגיפי מקודד חלבוני קפסיד מבניים. חלבונים אלה נעים לתוך הגרעין ומסייעים בהרכבה של נגיפים רקומביננטיים.
לאחר מכן, לקצור את התאים בתרבית. טפלו בהם בתמיסה המכילה חומר ניקוי ו-DNase. חומר הניקוי משחרר את התאים כדי לשחרר את הנגיפים. DNase מפרק כל DNA פלסמיד חופשי מהתרחיף. צנטריפוגה להפרדת פסולת תאית בכדורית. טען את הסופרנאטנט המכיל את הנגיף לתוך צינור הנושא תווך שיפוע צפיפות מתאים. צנטריפוגה להשגת שברים מרוכזים עשירים בנגיפים בתווך השיפוע.
בפרוטוקול הבא, נציג את ההכנה של נגיפים רקומביננטיים MCPyV בעלי טיטר גבוה באמצעות תאי 293TT.
- בשעות אחר הצהריים המאוחרות או בערב, ז
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים