Name: הגורל מיפוי בתאי גזע עובריים אנושיים על ידי גיבוש תפלצת (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-08-01T18:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 56 s
Description: למדו פרוטוקול להבדלת תאי גזע עובריים אנושיים בגוף חי ומיפוי גורלם התאי. השיטה כוללת השתלת תפלצת תחת כפסולת הכליה בעכבר וניתוח ההתמיינות לאורך 8-12 שבועות באמצעות אימונוהיסטוכימיה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענק מחקר מקיף של המכון בקליפורניה הרגנרציה לרפואה (RC1-00104), שירות הבריאות הציבורי גרנט (HL085377) מ NHLBI, ואת מתנת קרן Pollin ל HSB

<ol><li>Thomson, J. A., Itskovitz-Eldor, J., Shapiro, S. S., Waknitz, M. A., Swiergiel, J. J., Marshall, V. S., Jones, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+stem+cell+lines+derived+from+human+blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Embryonic stem cell lines derived from human blastocysts.</a> Science. 282, 1145-1147 (1998).</li>
<li>Hoof, D. V. an, D'Amour, K. A., German, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+insulin-producing+cells+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Derivation of insulin-producing cells from human embryonic stem cells.</a> Stem Cell Res. 3, 73-87 (2009).</li>
<li>Li, Z., Han, Z., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+human+embryonic+stem+cell-derived+endothelial+cells+for+vascular+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">Transplantation of human embryonic stem cell-derived endothelial cells for vascular diseases.</a> J Cell Biochem. 106, 194-194 (2009).</li>
<li>Safinia, N., Minger, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+hepatocytes+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Generation of hepatocytes from human embryonic stem cells.</a> Methods Mol Biol. 481, 169-180 (2009).</li>
<li>Nury, D., Neri, T., Puceat, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+embryonic+stem+cells+and+cardiac+cell+fate%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Human embryonic stem cells and cardiac cell fate.</a> J Cell Physiol. 218, 455-459 (2009).</li>
<li>Cowan, C. A., Klimanskaya, I., McMahon, J., Atienza, J., Witmyer, J., Zucker, J. P., Wang, S., Morton, C. C., McMahon, A. P., Powers, D., Melton, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+embryonic+stem-cell+lines+from+human+blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Derivation of embryonic stem-cell lines from human blastocysts.</a> N Engl J Med. 350, 1353-1356 (2004).</li>
<li>Schatten, G., Smith, J., Navara, C., Park, J. H., Pedersen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Culture of human embryonic stem cells.</a> Nat Methods. 2, 455-463 (2005).</li>
<li>Watanabe, K., Ueno, M., Kamiya, D., Nishiyama, A., Matsumura, M., Wataya, T., Takahashi, J. B., Nishikawa, S., Muguruma, K., Sasai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+ROCK+inhibitor+permits+survival+of+dissociated+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A ROCK inhibitor permits survival of dissociated human embryonic stem cells.</a> Nat Biotechnol. 25, 681-686 (2007).</li>
<li>King, F. W., Ritner, C., Liszewski, W., Kwan, H. C., Pedersen, A., Leavitt, A. D., Bernstein, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subpopulations+of+human+embryonic+stem+cells+with+distinct+tissue-specific+fates+can+be+selected+from+pluripotent+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Subpopulations of human embryonic stem cells with distinct tissue-specific fates can be selected from pluripotent cultures.</a> Stem Cells Dev. 18, 1441-1450 (2009).</li>
<li>Cunha, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelio-mesenchymal+interactions+in+primordial+gland+structures+which+become+responsive+to+androgenic+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Anat+Rec%22%5BJournal%5D)">Epithelio-mesenchymal interactions in primordial gland structures which become responsive to androgenic stimulation.</a> Anat Rec. 172, 179-195 (1972).</li>
<li>Kirsch, J. H., Klaus, J. A., Blizzard, K. K., Hurn, P. D., Murphy, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pain+evaluation+and+response+to+buprenorphine+in+rats+subjected+to+sham+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Contemp+Top+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Pain evaluation and response to buprenorphine in rats subjected to sham middle cerebral artery occlusion.</a> Contemp Top Lab Anim Sci. 41, 9-14 (2002).</li>
<li>Lee-Parritz, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analgesia+for+rodent+experimental+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Isr+J+Vet+Med%22%5BJournal%5D)">Analgesia for rodent experimental surgery.</a> Isr J Vet Med. 62, 74-78 (2007).</li>
<li>Julou, L., Guyonnet, J. C., Ducrot, R., Pasquet, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Some+pharmacological+and+toxicological+studies+on+ketoprofen%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatol+Rehabil%22%5BJournal%5D)">Some pharmacological and toxicological studies on ketoprofen.</a> Rheumatol Rehabil. , Suppl 5-10. (1976).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

יש לנו התאמה במבנה היעילה ביותר תפלצת assay לצורך מיפוי גורלו של הבחנה hESCs ב בסביבה vivo. מספר קטן של hESCs שנבחרו במיוחד הוא מעורבב עם סוג מובחן hESCs בר לקטינים vulgaris Phaseolus כדי ליצור גלולה התא. זהו מורכבים מתחת הקפסולה כליה עכבר immunodeficient. גורלם של hESCs שנבחר במקור אז יכול להיות נקבע על ידי אימונוהיסטוכימיה (איור 5), כפי שדווח בעבר (9). שיטה זו מספקת כלי רב ערך לזיהוי ויצירת רקמת ריאגנטים ספציפיים לטיפול מבוססי תאים.

<table><tbody><tr><td>2-מתיל-2-בוטנול</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>240486</td><td>אברטין (Avertin)</td></tr><tr><td>2,2,2-טריברומו&amp;#8211;אתנול</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T48402</td><td>אורטין (Avertin)</td></tr><tr><td>תפרי משי 4-0</td><td>Ethicon Inc.</td><td>641G</td><td></td></tr><tr><td>bFGF</td><td>R&amp;amp;D Systems</td><td>233FB</td><td></td></tr><tr><td>בופרנורפין</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B7536</td><td></td></tr><tr><td>Clear-Rite 3</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-046-341</td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז IV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5138</td><td></td></tr><tr><td>D-MEM</td><td>Invitrogen</td><td>11965</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Invitrogen</td><td>14190</td><td></td></tr><tr><td>פינצטה מסוג Dupont #5</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>500233</td><td>קפסולת הכליה</td></tr><tr><td>אוסין Y</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-245-658</td><td></td></tr><tr><td>סרום עגל עוברי (מוסמך)</td><td>Invitrogen</td><td>26140-079</td><td></td></tr><tr><td>אלכוהול גמיש</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-046344</td><td></td></tr><tr><td>זינקפה&amp;rsquo;המטוקסילין מס' 3</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-050-204</td><td></td></tr><tr><td>תפסן עורקי (המוסטט), ישר</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>501241</td><td>כירורגיה כללית</td></tr><tr><td>פינצטת איריס</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>15914</td><td>כירורגיה כללית</td></tr><tr><td>קטופרופן</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>K2012</td><td></td></tr><tr><td>KnockOut D-MEM</td><td>Invitrogen</td><td>10829</td><td></td></tr><tr><td>תחליף סרום KnockOut</td><td>Invitrogen</td><td>10828-028</td><td></td></tr><tr><td>L-גלוטמין</td><td>Invitrogen</td><td>25020-081</td><td></td></tr><tr><td>ספיגי MILLICELL</td><td>EMD Millipore</td><td>PICM01250</td><td></td></tr><tr><td>חומצות אמינו שאינן חיוניות</td><td>Invitrogen</td><td>11140-050</td><td></td></tr><tr><td>מספרי ניתוח</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>501754</td><td>כירורגיה כללית</td></tr><tr><td>פרפין (TissuePrep)</td><td>Fisher Scientific</td><td>8002-74-02</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין (Pen/Strep)</td><td>Invitrogen</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Permount</td><td>Fisher Scientific</td><td>SP15-100</td><td></td></tr><tr><td>PHA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L1668</td><td></td></tr><tr><td>ג'לטין חזيري</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G6144</td><td></td></tr><tr><td>מעכב ROCK</td><td>Calbiochem</td><td>Y-27632</td><td></td></tr><tr><td>עכברי SCID beige</td><td>Charles River Laboratories</td><td>250</td><td></td></tr><tr><td>סקוט&amp;rsquo;שטיפה</td><td>Fisher Scientific</td><td>6697-32</td><td>Ricca Chemicals</td></tr><tr><td>מספרי ואנאס עם קפיץ (Vannas spring scissors)</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>14003</td><td>קפסולת הכליה</td></tr><tr><td>&amp;#946;מרקפטו-&amp;#8211;אתנול</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M7522</td><td></td></tr></tbody></table>

הגורל מיפוי בתאי גזע עובריים אנושיים על ידי גיבוש תפלצת

Fate Mapping of Human Embryonic Stem Cells by Teratoma Formation 

בתאי גזע עובריים אנושיים (hESCs) יש יכולת מוגבלת להתחדשות עצמית, את היכולת להתמיין לתאי נגזר כל שלוש שכבות נבט עובריים (1). בידול בימוי של hESCs לתוך סוגי תאים מסוימים יצרה עניין רב בתחום של רפואה רגנרטיבית (למשל, (2-5)), וכן שיטות לקביעת<em&gt; In vivo</em&gt; גורל hESCs שנבחר או מניפולציות חיוניים למאמץ זה. יש לנו התאמה במבנה היעילה ביותר תפלצת assay למטרה זו. מספר קטן של hESCs שנבחרו במיוחד הוא מעורבב עם סוג מובחן hESCs בר לקטינים vulgaris Phaseolus כדי ליצור גלולה התא. זהו מורכבים מתחת הקפסולה כליה עכבר immunodeficient. מעטים ככל 2.5 x 10<sup&gt; 5</supHESCs&gt; יש צורך בטופס 16 ס&quot;מ<sup&gt; 3</sup&gt; תפלצת רוחנית בתוך 8-12 שבועות. גורלם של hESCs שנבחר במקור אז יכול להיות נקבע על ידי אימונוהיסטוכימיה. שיטה זו מספקת כלי רב ערך לאפיון רקמות ריאגנטים ספציפיים לטיפול מבוססי תאים.

בידול בימוי של hESCs לתוך תאים ספציפיים יצרה עניין רב ברפואה רגנרטיבית. אנו מספקים תמציתי, צעד אחר צעד פרוטוקול לקביעת<em&gt; In vivo</em&gt; גורל hESCs נבחר המספק כלי רב ערך לאפיון רקמות ריאגנטים ספציפיים לטיפול מבוססי תאים.

לתאי גזע עובריים אנושיים (hESCs) יש יכולת בלתי מוגבלת להתחדשות עצמית, והיכולת להתמיין לתאים השייכים לכל שלושת...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לגרום להבחנה של תאי גזע עובריים אנושיים in vivo ולקבוע את גורלם הספציפי לרקמה. דבר זה מושג תחילה על ידי יצירת כדורית (pellet) מתאים של תאים בעלי סימון גנטי. השלב השני של הפרוצדורה הוא השתלה כירורגית של הכדורית תחת קפסולת הכליה של עכבר עם מערכת חיסונית מוחלשת (immunocompromised).השלב השלישי של הפרוצדורה הוא להמתין ששמונה עד 12 שבועות להבחנה של משק התאים מתחת לקפסולה של כליות העכבר. השלב הסופי של הפרוצדורה הוא קציר של הטרטומה שנוצרה, קיבוע שלה בפורמלין, וניתוח גורלם של התאים המסומנים באמצעות אימונוהיסטוכימיה. בסופו של דבר, ניתן להוציא תוצאות המראות כי התאים המסומנים התפתחו לאחת או יותר משלוש שכבות העבפים, וזאת באמצעות היסטולוגיה ואימונוהיסטוכימיה של הטרטומה שנוצרה.שלום, אני קריסה ריטנר מהמעבדה של ד"ר הארול ברנשטיין במכון למחקר קרדיו-וסקולרי באוניברסיטת קליפורניה בסן פרנסיסקו. היום נדגים לכם הליך לפיתוח טרטוומות באמצעות השתלה בקפסולת הכליה. אנו משתמשים בהליך זה במעבדה שלנו כדי לחקור את הדיפרנציאציה של תאי גזע עובריים, הן כדי לוודא שכל שורה שבה אנו עובדים יכולה להתפתח לכל אחת משלוש שכבות הנבט והן כדי לעקוב אחר גורלם של תאי גזע המסומנים גנטית in vivo.כל הפרוצדורות שנציג מבוצעות באישור של הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של UCSF. כמו כן, כל העבודה עם תאי גזע עובריים אנושיים מבוצעת באישור של ועדת הפיקוח על מחקר תאי גזע של UCSF. אז בואו נתחיל.להכנת תרביות של תאי גזע עובריים אנושיים, אנא עיינו בחלק הטקסטואלי של פרוטוקול זה. עבור הערות בתוך מנדף זרימה למינרית, יש לטפל בתרביות תאי גזע עובריים אנושיים שעובדו עם מעכב ROCK באמצעות 1 mg/mL של collagenase four, להדגיר למשך חמש דקות ב-37 °C ו-5% carbon dioxide, ולשאוב את ה-collagenase four מהבאר. יש להחליפו ב-1 mL של DPBS בטמפרטורת החדר, בתוספת 10% penicillin streptomycin.השתמש במגבב תאים בעל ראש שטוח כדי לגרד את המושבות מהצלחת, והעבר 0.5 milliliters של תגלוש התאים לכל אחד משני מבחנות מיקרו-צנטריפוגה. שטוף את הבאר עם one milliliter של DPBS והעבר 0.5 milliliters מהשטיפה לכל מבחנה. סבב את המבחנות במשך 20 שניות ב-8,000 times gravity, שאב את העליון ותלה את כל משקע בתמיסת 500 microliters של DPBS טרי עם 100 microliters של one milligram per milliliter.הוסף לכל מבחנה לקטין Fasi vulgaris ב-DPBS כדי לסייע בקישור התאים זה לזה לצורך השתלה. דגרי את תרחיף התאים בטמפרטורת החדר למשך חמש דקות. סובב את התאים ב-8,000 ×g למשך שתי דקות כדי להחליק את המשקע.סובב את המבחנות ב-180 מעלות בתוך תאי הרוטור. לאחר מכן, סובב שוב ב-8,000 ×g למשך שתי דקות.שאבו בזהירות את ה-SUP nasin, תוך השארת המשקעים שלמים כדי להפרידם מהדופן של המבחנה. העבירו בעדינות באמצעות פיפט 200 microliters של תווך KSR לצד קצה המשקע עד שזה יתרומם לאט. ברגע שהמשקע השתחרר, שאבו מיד את התווך לתוך milli cell של 0.4 micrometer.החדירו לבאר המכילה 3 mL של KSR.Medium. הדאיגרו למשך שעתיים עד ללילה ב-37 °C ו-5% carbon dioxide. הניחו עכבר עם חסר חיסוני המורדם על משטח חימום כדי למנוע היפותרמיה.השתמשו במספרי ניתוח ובפינצטת איריס כדי לבצע חתך של 2.5 סנטימטר דרך העור במקביל לעמוד השדרה, אך מעט מחוץ למרכז. בצעו חתך קטן יותר דרך השריר, ממש מתחת לצלעות ובמרחק של כסנטימטר אחד מעמוד השדרה.החתך צריך להיות גדול מספיק כדי שניתן יהיה למשוך דרכו את הכליה, אך קטן מספיק כדי שהכליה לא תחליק חזרה אל חלל הבטן ללא הפעלת כוח. באמצעות פיפטת פסטה שעוצבה לצורת וו קהה, משכו בעדינות את הכליה דרך החתך בשריר. הרטיבו את הכליה מעת לעת ב-DPBS סטרילי באמצעות פינצטה עדינה, כדי למנוע מהקפסולה השבירה להתייבש.משכו בעדינות את הקפסולה הרחק מהכליה. השתמשו במספרי Venice Spring כדי לבצע חתך של שני מילימטרים בקפסולה. במרכז הכליה, הכניסו פיפטת פסטה שהפכה לProbe קהה ועדין מאוד בין הקפסולה לכליה, ונערו בעדינות כדי ליצור כיס קטן; חזרו על הפעולה בצד השני של הכליה כך שיהיו שני כיסים.אחד בכל קוטב של הכליה. באמצעות טיפ פפית רחב על פפית העברה חד-פעמית, הרימו משקע בודד מתוך תא המילי-סל (milli cell insert).קחו כמות מinimum של מצע, שכן עודף מצע עלול להפריע להעברת המשקע. השתמשו בפינצטה כדי להרים את קצה הכיס בכליה. הניחו בעדינות את המשקע לצד הפתח והשתמשו בטיפ של הפיפטה כדי לדחוף אותו לתוך הכיס לכיוון אחד מקטבי הכליה.הניחו גלולה שנייה בתוך התושבת לכיוון הקוטב הנגדי. הניחו בזהירות את הקפסולה בחזרה על הגלולות. אין צורך בתפרים כדי לסגור את הקפסולה.השתמשו בפיפטה עם וו כדי לדחוף בעדינות את הכליה חזרה אל חלל הבטן. חתך השריר צריך להיות קטן מספיק כדי שניתן יהיה לאטום אותו בתפר משי בודד. סגרו את העור באמצעות סדרה של ארבעה עד חמישה תפריים רצופים (interrupted stitches) והניחו לבעל החיים להתאושש מהניתוח לפני החזרתו למתקן גידול בעלי החיים שמונה עד 12 שבועות לאחר הניתוח.הסיר את הטרטומה של הכליה ואת כל הציסטות הסובבות אותה מחלל הבטן כגוש רקמה אחד. העבר את כל גוש הרקמה המוצאה אל מבחנה פוליפרופילן של 50 milliliter המכילה תמיסת קיבוע (buffered formula) בריכוז 10%. השאר את הטרטומה לקיבוע בטמפרטורה של ארבעה מעלות Celsius למשך לילה.הוצא את הטרטומה מהמבחנה והנח אותה על משטח עבודה. השתמש בסכין ניתוח (scalpel) כדי להסיר ציסטות וכמה שיותר מרקמת כליה, מבלי לפגוע בטרטומה עצמה. טרטומות גדולות יותרניתן לחתוך לשניים כדי להקל על הניתוח וההטמעה (embedding).עבדו את הטרטומה באמצעות טכניקת קיבוע סטנדרטית בפראפין, וצבעו והצמידו חתכים על למסות לצורך ניתוח והדמיה. עיינו בהערות בחלק הטקסטואלי של הפרוטוקול לקבלת פרטים נוספים. כאן נציג לכם חתכי רקמה מטרטומה טיפוסית.טרטומה זו נצבעה ב-hemat and eoin כדי לזהות רקמות עובריות, המייצגות את שלושת שכבות הנבט, והיא מראה מבנה ראשוני של צינור עצבים המייצג את ה-vector derm. חתך זה מספק דוגמה נוספת ל-vector derm, ובמקרה זה אפיתל קשקיש פרימיטיבי. כאן, סחוס המוקף בקפסולה של מזנכימה דחוסה מייצג רקמות הגזרות מהמזודרם העוברי.לבסוף, חלק זה, המראה מבנה מעי בלוטתי, מדגים רקמת אנדודרמה בתוך הטרטומה; כדי למפות את גורלן של תאי גזע המסומנים גנטית, זרעו בטרטומה תערובת של תאי גזע עובריים אנושיים מסוג wild type ותאים חיוביים ל-CD 1 33. תאים נגזרים חיוביים ל-CD 1 33, המסומנים בחצים, נצפו ברקמות הנובעות מהאקטודרמה העוברית, ובייחוד בנוירואפיתל ובמבנים ראשוניים דמויי צינור עצבי. אני ד"ר הארואלד ברנשטיין.קריסה הראתה לכם זה עתה כיצד להיווצר טרטומה מתרביות של תאי גזע עובריים אנושיים כדי לספק בדיקת התפתחות in vivo. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לזכור לנהוג בזהירות עם התאים שלכם ולהקפיד על טכניקה אספטית. וזהו.תודה שצפיתם ובהצלחה בניסוייכם.

fate-mapping-of-human-embryonic-stem-cells-by-teratoma-formation

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

דג הזברה השתלת מאפשר שילוב של גנטיקה אמבריולוגיה ליצור מפלצות רקמות ספציפיות. וידאו זה מדגים gastrula מבוים השתלות תא אפשרו במעבדה שלנו כדי לחקור את התפקידים של אוכלוסיות astroglial ו רמזים הנחיות ספציפיות במהלך היווצרות השליכה בקידמתו.

ממוקד רקמות מפלצות עובריים: דג הזברה Gastrula השתלת תאים

מיפוי גנטי הגורל ועין מתנהלת (GIFM) סימני עקבות תאים עם שליטה במרחב ובזמן...

גישה מעשית מיפוי גנטי ועין מתנהלת הגורל: מדריך חזותי כדי מארק עקוב אחר תאים In vivo</em

אדם בתאי גזע pluripotent (hPSCs) יש פוטנציאל לטפל מספר עצום של מחלות שונות. השירות של תאים אלה הוא בכך שהם יכולים להתמיין לכל סוג תא בגוף. כאן אנו מתארים את assay תפלצת רוחנית, אשר משמש כדי להדגים את pluripotence של hPSCs.

תפלצת רוחנית דור הקפסולה testis

גורלו של תא עוברי אדם יכול להיות מושפע על ידי מולקולות ירושה ו / או על ידי אותות מתאים שכנים. ניצול מפות גורלו של עובר Xenopus שלב המחשוף, לסטומרים בודדים ניתן לזהות לתרבות בבידוד כדי להעריך את התרומה של מולקולות ירושה לעומת אינטראקציות תא סלולרי.

Explants Blastomere לבדיקת מחויבות גורל תא במהלך התפתחות עוברית

יש תאי גזע אנושיים pluripotent (hPSCs) את היכולת הפנימית להבדיל עצמי לארגן לתוך דפוסי רקמה ייחודיים; אם כי זה דורש ההצגה הדרגתית סביבה המרחבית. אנו מציגים סטנסיל micropatterning כשיטה פשוט חזקה כדי ליצור הדרגתי ביוכימיות מכאניות לשליטת דפוסי בידול hPSC.

סטנסיל micropatterning של תאי גזע האנושי pluripotent עבור גשוש הארגון המרחבי של גורל הבידול

במחקר זה, אנו מייצרים תאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים מתאי מי שפיר של עכברים, באמצעות מערכת טרנספוזון שאינה מבוססת ויראלית.

את ייצור תאי גזע פלוריפוטנטיים מתאי מי שפירים עכבר באמצעות מערכת transposon

פרוטוקול זה מתאר את התכנות של ראשי מי השפיר נוזל לבין הממברנה בתאי גזע mesenchymal לתוך תאי גזע pluripotent המושרה באמצעות גישה episomal-שילוב בתנאים מוגדרים לחלוטין מבחינה כימית. תהליכי מיצוי, תרבות, התכנות, ואפיון של תאי גזע pluripotent המושרה הנוצרת על ידי שיטות מחמירים מפורטים.

התכנות ראשי מי שפיר ו ממברנות התאים כדי Pluripotency בתנאים קסנו-חופשית

ליגתאי מטריקס ניתן להיות בתבנית על הידרואקרילאמיד הידרו כדי לאפשר את התרבות של תאים גזע האדם העובריים במושבות מוגבלים על מצעים תואמי. שיטה זו יכולה להיות משולבת עם מיקרוסקופ כוח המתיחה ביוכימיה ביוכימית לבחון את הגומלין בין הגיאומטריה רקמה, כוחות שנוצר התא, ואת מפרט הגורל.

הקמת הגיאומטריה של האדם תא גזע עובריים המושבות על מצעים תואמי כדי לשלוט במכניקה ברמת רקמות

במחקר זה, אנו מציגים בדיקת תאים במבחנה לזיהוי כימיקלים טרטוגניים. הדינמיקה של איתות גורם גדילה פיברובלסטים (FGF) / גורם תגובה בסרום (SRF) נמדדה בתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים אנושיים (iPS), והסיכון לטרטוגניות הוערך על ידי כימות שיבוש כימי של מסלול איתות זה.<br...

בדיקת רעילות התפתחותית המבוססת על ניטור בזמן אמת של שיבוש אותות גורם גדילה פיברובלסטים בתאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי בני אדם

רביה של האדם גזע עובריים (ES) תאים

למדו פרוטוקול להבדלת תאי גזע עובריים אנושיים בגוף חי ומיפוי גורלם התאי. השיטה כוללת השתלת תפלצת תחת כפסולת הכליה בעכבר וניתוח ההתמיינות לאורך 8-12 שבועות באמצעות אימונוהיסטוכימיה.

הגורל מיפוי בתאי גזע עובריים אנושיים על ידי גיבוש תפלצת

גלה סרטונים נוספים