שינוי גנטי של קרטינוציטים אנושיים ראשוניים: שיטה למניפולציה גנטית של קרטינוציטים באמצעות רטרו-וירוסים רקומביננטיים

- קרטינוציטים הם סוג התא הבולט הקיים באפידרמיס או בשכבה החיצונית ביותר של העור. כדי לשנות גנטית קרטינוציטים, התחל בתרבית של תאי עוף חול באריזה רטרו-ויראלית. לאחר מכן, להוסיף תערובת המכילה וקטורים רטרו-ויראליים הנושאים את הגן של עניין מגיב transfection. דוגרים על הצלחת למשך הזמן הרצוי.

מגיב הטרנספקציה מאפשר משלוח של חומר גנטי נגיפי לתוך תאי האריזה. תאים אלה שתוכננו במיוחד מקודדים חלבונים הדרושים לייצור קפסיד רטרו-ויראלי ומקדמים את האריזה של RNA וקטורי רטרו-ויראלי הנושא את הגן המעניין. עם האריזה, וירוסים בוגרים יוצאים מהתאים אל התקשורת. כעת, העבירו את המדיה המושהה על ידי הנגיף לצלחת תרבית חדשה המכילה קרטינוציטים ראשוניים. הגדילו את התרבית עם תמיסת פולימר קטיונית רצויה.

הפולימר הקטיוני מנטרל את המטענים השליליים על קרומי הנגיפים והקרטינוציטים, ומגביר את יעילות האיחוי הנגיפי עם פני התא. לאחר האיחוי, הנגיף משחרר את הרנ"א שלו לתוך הציטופלסמה של התא, אשר הופכת את התעתיק לדנ"א דו-גדילי. DNA ויראלי זה נכנס לגרעין ומשתלב עם גנום הקרטינוציטים, מה שמוביל לשינויים גנטיים. בפרוטוקול הבא, נציג את השינוי הגנטי של קרטינוציטים אנושיים ראשוניים באמצעות טרנספקציה רטרו-ויראלית.

- יום לפני ההדבקה, זרעו תאי עוף החול במדיה שלמה לצלחת בת 6 בארות בצפיפות של 800,000 תאים לבאר. ביום של transfection, לערבב 6 מי