אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 6:44 דק׳ • April 30th, 2023
- בדיקת היווצרות מושבה קובעת את יכולתם של תאים בודדים להתרבות וליצור מושבות. התחילו עם עור עכבר-גבי נכרת בצלחת תרבית. יש לגרד את הרקמה התת עורית והשומן מהצד הגחוני של העור. לטפל ברקמה עם פתרון עיכול. האנזימים הפרוטאוליטיים בתמיסה מפרקים את המטריצה החוץ תאית, וגורמים לדיסוציאציה של תאי האפידרמיס.
גרדו בעדינות את שכבת האפידרמיס כדי לשחרר את התאים והשערות המנתקים למצע קציר. סנן את התרחיף דרך מסננת מתאימה כדי ללכוד שערות או כל פסולת ולקבל תרחיף חד תאי של תאי האפידרמיס. העבירו את הנפח הרצוי של תרחיף תאים זה לצלחת מצופה קולגן המכילה שכבה דבקה של תאי הזנה שנעצרו. תוספת עם מדיה מתאימה המעדיפה הישרדות keratinocyte.
במהלך התרבית, הקרטינוציטים נצמדים לשכבת ההזנה. בנוסף, תאי הזנה אלה מפרישים גורמי גדילה ומסנתזים חלבוני מטריצה חוץ-תאיים התומכים בצמיחת קרטינוציטים. בהתאם ליכולת ההתרבות של קרטינוציטים בודדים, הם מתחילים ליצור מושבות. הסר את המדיה ותקן את המושבות. לצבוע את התאים עם צבע מתאים כדי לזהות את המושבות לספירה. בפרוטוקול הבא נבצע את הבדיקה הקלונוגנית של קרטינוציטים ראשוניים שנקטפו מהעכברים הבוגרים לאחר הטיפול בתרכובות בדיקה.
- לאחר קצירת דגימות עור גבי מעכברים בוגרים שעברו המתת חסד, השתמשו במלקחיים אוטוקלאביים ובאזמל כדי להניח עור גבי אחד בכל פעם, שעיר כלפי מטה, לתוך צלחת פטרי דקה ולגרד א
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים