אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 4:07 דק׳ • April 30th, 2023
- בדגי זברה, מלנומה נובעת מטרנספורמציה ממאירה של מלנוציטים - התאים מייצרי המלנין. כדי לחקור את הופעת המלנומה, השתמשו במודל של דגי זברה טרנסגניים עם מחסור במלנומה. מודל זה חסר מלנוציטים עקב מוטציה של אובדן תפקוד במקדם המיצית הספציפי למלנוציטים.
התחל על ידי לקיחת עובר חד תאי של מודל מהונדס זה על צלחת אגר. הזרקה משותפת תערובת המכילה וקטור miniCoopR מבוסס טרנספוזון ואנזים טרנספוזון mRNA לתוך העובר. הווקטור מכיל קלטת גן, המורכבת ממיניגן מיטפה נושא מקדם המחובר לגן מועמד הדחוק בין שני יסודות טרנספוזון.
ה-mRNA המוזרק בהזרקה משותפת מקודד חלבוני טרנספוזאז. חלבונים אלה פועלים על יסודות הטרנספוזון ומזרזים את כריתת הקלטת מווקטור המיני-קואופר, ולאחר מכן את שילובה בדנ"א הגנומי של העובר. לאחר מכן, מקדם הקלטות מניע את הביטוי הן של גן המיטפה והן של הגן המועמד המעניין.
גן המיטפה תומך בהצלה והתפתחות של מלנוציטים, ואילו הגן המועמד, אם הוא אונקוגני, גורם להתפרצות מלנומה. מסך את דג הזברה המפותח. דגים טרנסגניים עם מלנוציטים שניצלו מפתחים פיגמנטציה של מלנין, ואילו אלה הנושאים מלנומה נושאים נגעים פיגמנטיים מורמים.
בפרוטוקול הבא, נציג את ההקרנה של משנים להופעת מלנומה באמצעות וקטורים miniCoopR במודלים של גידולי דגי זברה טרנסגניים.
- כדי ליצור מבנים להזרקה, התחל ביצירת שיבוטים של כניסה אמצעית על ידי PCR המגביר
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים