אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:45 דק׳ • April 30th, 2023
- גורמי שעתוק הם חלבונים המכילים תחומים קושרי DNA. הם נקשרים לרצפי דנ"א ספציפיים ומסייעים לווסת את ביטוי הגנים בתאים. כדי לזהות ביטוי פקטורי שעתוק במלנוציטים הקשורים לקשקשים, ראשית, קצרו קשקשים גביים בעלי פיגמנטציה כהה מדגי זברה מורדמים. תקן את הקשקשים וטפל בהם עם פתרון חדירה כדי להפוך את המלנוציטים בודדים לחדירים.
טפלו בתמיסת אקונומיקה כדי להסיר את גרגרי פיגמנט המלנין הכהים מהתאים. תהליך הלבנה זה מבטל את הסיכויים לאותות רקע הקשורים לפיגמנט במהלך שלבי הצביעה הבאים. דגירה עם תמיסה חוסמת המכילה חלבונים כדי לחסום אתרי קישור חלבונים לא ספציפיים על פני התא.
כעת, יש לטפל בדגימה עם הנוגדנים הראשוניים הרצויים. נוגדנים אלה נקשרים לגורמי שעתוק המטרה שלהם בתוך התאים. לאחר מכן, תייגו את הדגימה עם נוגדנים משניים מתויגים פלואורסצנטיים ספציפיים לנוגדנים הראשוניים. בנוסף, טפלו בדגימה בצבע קושר DNA פלואורסצנטי מתאים כדי להכתים את גרעיני התא. השתמש במיקרוסקופ פלואורסצנטי כדי לזהות פליטות פלואורסצנטיות בהירות ממכלולי גורמי השעתוק-נוגדנים וגרעיני התא.
בפרוטוקול הבא, נראה את ההכתמה החיסונית של מלנוציטים הקשורים לקשקשים גביים המבטאים גורם שעתוק מעורר מלנוציטים-A, או מיטפה, בדג זברה מהונדס.
- כדי לבצע immunostaining, להרדים את הדג ב 0.17 מיליגרם למיליליטר של טריקאין. עם אור אירוע תחת מיקרוסקופ מנתח, השתמ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים