אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 5:05 דק׳ • April 30th, 2023
- כדי להתחיל את הבדיקה, ראשית, פיפטה תרחיף תא פיברובלסט בתוספת חומצה אסקורבית לתוך צלחת באר לדגור. חומצה אסקורבית מגבירה את התפשטות הפיברובלסטים. הוא גם מגרה את הפרשת רכיבי ECM טבעיים, ובכך מטביע את התאים המתרבים לתוך המטריצה החוץ תאית העבה.
שחררו בעדינות את המטריצה משטח הצלחת ואפשרו לה לצוף במדיה. המטריצה מתכווצת ונעשית עבה יותר עם יותר שיקוע מטריצה ושיפוץ, מה שמוליד רקמה הדומה לדרמיס המקומי. מורחים את המטריצה על רשת נקבובית. לאחר מכן, זרעו את תאי סרטן האפיתל מעל המטריצה ודגרו כדי שהתאים יתיישבו ויצטרפו.
מעבירים את ההרכבה למשטח מרושת שהורכבה מראש בצלחת. הוסף מדיה כדי להשלים רק את השכבה התחתונה של המטריצה כדי ליצור ממשק אוויר-נוזל עבור התאים לעיל. במהלך התרבית, הממשק מקדם התרבות וההתמיינות של תאי הגידול. התאים גם מפרישים פרוטאזות שפוגעות ב-ECM, מה שמקל על נדידתם ופלישתם לתוך המטריצה.
בפרוטוקול הבא, נדגים בדיקת פלישה באמצעות תאי קרצינומה עורית של תאי קשקש על מטריצה טבעית שמקורה בפיברובלסטים סטרומה ראשוניים.
- התחל על ידי זריעת 200,000 פיברובלסטים לכל באר בצלחות 6 בארות במדיה פיברובלסטים בתוספת חומצה L-אסקורבית טרייה 2-פוספט. הזן מחדש את התאים כל 2 עד 3 ימים עם 2 עד 5 מיליליטר של מדיה טרייה. שכבה עבה של תאים המשובצים במטריצה חוץ-תאית, הנראית לעין בלתי, תיווצר בתום 6 שבועות. בהתאם לתא
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים