18 באפריל 2011
Pseudofracture, מודל Murine לשחזור הטראומה שרירים ושלד סטרילי, מאפשרת הערכה של המנוח פוסט טראומטית התגובות טווח החיסונית. מאמר זה מתאר את נוהלי ביצוע של צעד אחר צעד את המודל, כולל פוטנציאל שילובים מודל ניסיוני כדי לאפשר לימוד של טראומה מרובים.
כאשר עצם ארוכה, כגון עצם הירך או השוקה נשברת, השריר והרקמה הרכה הפגועים נחשפים לשברי עצם פגומים ולמח עצם. לאחר מכן מגיעה תגובה חיסונית חזקה כדי לסייע בתיקון רקמות. ניתן ליצור מודל לחקר ההשפעות של חשיפה זו על ידי קצירת עצם הירך והשוקה.
מעכבר תורם. העצמות נמעכות ליצירת תמיסת עצם, אשר מוזרקת לאחר מכן לירך הפגועה של עכבר מקבל. לאחר מכן עוקבים אחר התגובות החיסוניות ומוערכים פגיעות איברים מרוחקות כדי לחקור את ההשפעות ארוכות הטווח של טראומה הנגרמת משבר.
היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני השיטות הקיימות לטראומה של רקמות היקפיות, כמו מודל שבר הירך הדו-צדדי, הוא שמודל זה, מודל השבר המדומה, מאפשר הישרדות לטווח ארוך ללא סיבוכים של הרדמה ממושכת או טכניקות קיבוע שברים מורכבות, ומכאן מאפשר לחקור תגובות חיסוניות בטווח המאוחר לאחר הטראומה. לפני תחילת ההליך, הכינו את האספקה הבאה: דלי קרח, מכשירים כירורגיים בטדין, המוסטטים של GREs, מלקחיים מרגמה ועלי, 20 מחטים מד, מזרק CC אחד, הרדמת PBS וחרוט אף פלואור איזוף. התאמת גיל ומשקל בודדת בהמתת חסד.
עכבר תורם גני אמור לספק מספיק חומר לשלושה מושתלים. הדביקו את התורם ללוח פרספקס, והקפידו להדביק את הגפיים התחתונות רק בקצה כף הרגל. גלח בזהירות את הגפיים התחתונות.
לאחר מכן לכסות אותם לחלוטין בבטדין ואלכוהול לסטריליות כדי להסיר את העצמות הארוכות מהגפה התחתונה, לבצע חתך כירורגי בעור באזור המפשעה, ולהמשיך לחתוך את העור לאורך הגפה עד הקרסול, למשוך את העור ולנתח אותו מהחזית והשריר התת עורי, הן בהיבט המדיאלי והן בהיבט הרוחבי. לאחר מכן הכנס להב אחד של המספריים מתחת לשרירים הנמצאים קדמיים ורוחביים לשוקה. החלק את הלהב קרוב ודיסטלי כדי להרים את השרירים בצורה נקייה מהעצם הבסיסית.
חזור על טכניקה זו בצד התחתון האחורי והמדיאלי של השוקה כדי להפריד את השרירים מתחת לשוקה. יש להשתמש במאמץ נוסף מינימלי בצד האחורי בעת החלקה דיסטלית כדי להרחיק את הפיבולה מהשוק בקצה הפרוקסימלי של שרירי הרגליים הללו. חותכים את הגידים קרוב ככל האפשר להחדרתם ומושכים את השרירים באופן דיסטלי תוך משיכת קבוצת השרירים יחד בצורה כלפי מטה, משיכה קטנה תשחרר את החיבורים הדיסטליים ממפרק הקרסול באמצעות מספריים שנחתכו דרך מפרק הקרסול.
אין לנתק את השוקה מעצם הירך בשלב זה, חיבור זה נותן מנוף נוסף שיסייע בדיסקציה של עצם הירך ממפרק הירך. השתמש בטכניקה דומה לשחרור השרירים מעצם הירך. בצע זאת מאחור וגם מדיאלית ורוחבית במידת הצורך.
חתוך את החיבור הדיסטלי של קבוצות שרירים אלה כדי לשחרר אותן ממפרק הברך. יש להאריך את חתך העור לפי הצורך כדי להשיג חשיפה מספקת ולעקוב מתחת לשרירים. כדי לנתח את קצה עצם הירך ממפרק הירך, הסר את עצם הירך והצמד את עצם הירך מהעכבר התורם והניח אותם על גזה סטרילית.
הפרד את שתי העצמות במפרק הברך פשוט על ידי אחיזה של כל עצם ביד נפרדת וסיבוב עדין של שתי העצמות בכיוונים מנוגדים לאורך ה-AEs הארוכים שלהן. כדי להסיר את חיבורי הגידים הנותרים מהעצמות הארוכות, עטפו חתיכת גזה של ארבע על ארבע סביב אורך העצם. אחוז בחוזקה וגרד את כל אורך העצמות מספר פעמים כדי להסיר את הרקמות הנותרות מהשטח.
הנח את העצמות שנאספו לתוך שפופרת מיקרו סטרילית של 1.5 מיליליטר על קרח. העבר את עצמות התורם לארון בטיחות ביולוגי מחוטא היטב. להכנת תמיסת העצם.
יש להכין את מכסה המנוע עם חבישת שדה סטרילית, מרגמה ועלי סטריליים, זוג מלקחיים סטריליים, צינור סטרילי של שמונה מיליליטר PBSA פיפט מיליליטר אחד עם קצות פיפטה מתאימים. איש פיפטה של 100 מיקרוליטר עם קצות מתאימים, מזרקים של מיליליטר אחד ו-20 מחטים באמצעות המלקחיים, מעביר את העצמות לתוך המרגמה ומשתמש בעלי כדי לרסק בעדינות את העצמות. הכניסו מיליליטר אחד של PBS לתוך המרגמה והמשיכו לרסק את השברים הנותרים בתנועות סיבוביות כדי להבטיח השעיית החייאה מלאה.
לאחר מכן הוסיפו עוד מיליליטר אחד של PBS והמשיכו לרסק כדי ליצור את תמיסת העצם, שאמורה להיות בעלת גוון ורוד. שפכו לאט את התמיסה מהטיט לתוך צינור שמונה מיליליטר תוך הקפדה על שאריות גדולות יותר שיישארו מאחור. העבירו את תמיסת העצם למזרק מיליליטר אחד.
בעזרת מחט בגודל 20, תמיסת העצם צריכה להישאר על הקרח. פיפטה מיקרוליטר אחד של תמיסת העצם על צלחת מק קונגר המתפשטת באופן שווה על פני השטח. דגרו את הצלחת למשך 24 עד 48 שעות כדי להבטיח סטריליות.
התחל את ההליך הכירורגי לפגיעה ברקמות רכות והזרקת תמיסת עצם על ידי הערכת עומק ההרדמה של עכבר מורדם פנטה ברביטל על ידי הבוהן. קמצוץ. הנח את העכבר במצב שכיבה על לוח פרספקס ושיתק את החיה על ידי עטיפה רופפת של רצועות דקיקות של סרט דביק החוצה סביב החלק הדיסטלי של כל גפה באמצעות אוסקר קוצץ חמישה עם להב בגודל 40. לגלח את אזורי הבטן, המפשעה והירכיים של בעל החיים.
העבר את העכבר לשדה הניתוחי הסטרילי. נגב את אזור הניתוח עם בטאדין. ואז נגב באלכוהול כדי לעקר אותו.
הניחו חרוט אף על העכבר המכיל חתיכת גזה עם מיליליטר אחד של 99% זה פלואור. ברגע שהנשימה של החיה מתחילה להאט, הסר את חרוט האף. אם נדרשת הרדמה נוספת לאורך כל חלק של ההליך, ניתן להזריק פנטוברביטל נוסף או לתת איזוף פלואור.
לאחר מכן, חבישת שדה סטרילית ועוטפת אותה על פני העכבר כדי לאפשר חשיפה של הגפיים התחתונות והראש בלבד. פגיעה זו ברקמות רכות היא פציעת ריסוק דו-צדדית בגפיים האחוריות. ודא שהעכבר ממוקם כשהגפיים האחוריות חטופות מעט ומסובבות לרוחב.
זה עוזר בנגישות לשריר הנכון. קבץ את מכופפי הברך לביצוע פציעת הריסוק מהדק המוסטט גדול של 18 סנטימטר סביב נקודת האמצע של שרירי הירך האחורית לאורך עצם הירך כשהעקומה הקמורה שלו פונה לעצם הירך. נעל את המוסטט סגור ללחיצה הראשונה למשך 30 שניות בלבד.
הכנס את המחט דרך העור שניים עד שלושה מילימטרים מכיוון שקצה השיפוע פשוט נוגע בעצם הירך. הזרקו 0.15 מיליליטר מתמיסת העצם לשרירי הירך המרוסקים מכל צד. משוך את המחט והנח במהירות אצבע עטויה כפפה סטרילית על מקום ההזרקה כדי לעצור כל זרימה חוזרת של תמיסת עצם מהפצע.
החזיקו את האצבע הזו שם למשך מספר שניות. החזר את העכבר לכלוב ואפשר חופש תנועה מלא ישירות עם שההרדמה שוככת. הולם. יש לנהל טיפול בכאב כאשר העכבר מתעורר.
סכימה כללית זו מציגה את התגובה החיסונית הדו-פאזית לאחר טראומה בנקודת הזמן של שעת האפס. טראומה נגרמת לאחר מכן מגיעה תגובה היפר דלקתית מוקדמת שניתן לראות שמגיעה לשיאה לאחר שש שעות ונמדדת באמצעות הערכה של דלקת מערכתית ותפקוד לקוי של איברים מרוחקים.
המרכיב השני של התגובה החיסונית הפוסט-טראומטית הוא דיכוי חיסוני מושהה הנמדד על ידי תפקוד לקוי של תאי החיסון ומתואר כשוקת בסביבות 48 שעות. זהו דיאגרמה מייצגת של תגובת הציטוקינים הדלקתיים בפלזמה המתרחשת מוקדם לאחר הטראומה ומהווה דוגמה לדלקת מערכתית. תפקוד לקוי של איברים מרוחקים כפי שנמדד באמצעות פגיעה בכבד נמצא מוגבר במסגרת זמן דומה.
תרשים מייצג זה הוא דוגמה להדגשת תפקוד לקוי של תאי מערכת החיסון מאוחר לאחר טראומה. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור להקפיד על סטריליות ומניפולציה מדויקת לאורך כל הניסוי. זה לא מודל של שבר אמיתי או של זיהום בפצע.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
מאמר זה מציג מודל מורין של טראומה מוסקולרית-שלדית סטרילית המכונה pseudofracture, אשר מאפשר הערכה של תגובות חיסוניות מאוחרות לאחר טראומה. ביצוע ההליך של מודל זה מתואר בפירוט, תוך הדגשת הפוטנציאל שלו לשילובים ניסיוניים לחקר טראומה מרובה.
The pseudofracture murine model enables reproducible investigation of acute and late-phase immune responses to sterile peripheral tissue trauma, addressing a critical gap in translational trauma research. Its design circumvents the technical and survival limitations of traditional fracture models, supporting long-term mechanistic studies relevant to immunologic de-risking and target validation. This model is positioned to inform early discovery and preclinical evaluation of immunomodulatory strategies in trauma and tissue repair portfolios.
This model bridges early discovery and preclinical research by enabling hypothesis-driven testing of immune responses to trauma and supporting downstream biomarker and therapeutic validation.