Name: במדידה Micro-vivo מחזור בשרירי השלד על ידי מיקרוסקופית תוך חיוני (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-05-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 31 s
Description: למד שיטת מיקרוסקופיה תוך חיונית למדידת זרימת דם במיקרו-מחזור בשרירי שלד. טכניקה זו מאפשרת תצפית ארוכת טווח ומדידה כמותית של פרמטרי זרימת דם ברמת הנימים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

אנו מודים ג&quot;ו ליכטמן על העצה שלו בהתבוננות vivo של השרירים.

RBC מכתים קרום <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכבר לתאי דם אדומים תוקנו מהמאמץ אותו עם העכבר heparinization. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכבר RBC הוכתמו לצבוע PKH26 (551/567 ננומטר, והמקשר האדום פלורסנט תא הערכה, Sigma, ארה&quot;ב). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> RBC נשטפו PBS ו מודגרות עם פתרון 2μM של צבע PKH26 במשך 5 דקות בטמפרטורת החדר. התגובה נעצר על ידי הוספת פלזמה (חום מובטל במשך שעה 1 ב 65 ° C מראש) ו מודגרות דקה 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> RBC מוכתם נשטפו 5 פעמים עם PBS. </li></ol> עכבר הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שלושה עד שישה חודשים הישן זכר C57BL/10 עכברים ששימשו במחקר זה. אנו עכברים בהרדמה על ידי הזרקה של intraperitoneal pentobarbital (50mg/kgBW). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים היו צנרר ואז עם צינור 20-gage פוליאתילן, מאוורר מכני, וחיממה על 37 מעלות צלזיוס החימום גיליון Kapton מחובר חיישן תרמי וטמפרטורה משוב מערכת הבקר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הצד הגחוני של הצוואר היה מגולח. השרירים sternomastoid ימין ועל שמאל נחשפו. השרירים נתמכו על ידי בעל נירוסטה superfused עם פתרון סטרילי Ringer קרבס. </li></ol> הזרקה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> RBCs ויטראז היו התחמם ב 37 מעלות צלזיוס, בדילול מלא עם קרבס Ringer. 50ul של RBC מוכתם (המטוקריט 12%) היה מוזרק עכבר מהעורק הפין. </li></ol> בהתבוננות מיקרוסקופית vivo של שרירי השלד עקבנו שיטת ג&#39;ף ליכטמן וו &#39;s עם שינוי 1: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעלי חיים הונחו על כרית חימום על גבי הבמה בעבודת יד ברזל של מיקרוסקופ Nikon Eclipse-800. מים טובלים עדשות אובייקטיבי נוצלו לצורך השגחה עלית פלורסנט לחיות. צפינו PKH26 מוכתם בתוך RBC של כלי הדם זורם תחת אור הניאון של מנורת כספית. זיהינו arterioles העיקרי, arterioles משניים, נימים וורידים על ידי כיוונים RBCs שלהם זרימה ארכיטקטורות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מצלמה SIT התעצמה (Hamamatsu Photonics, C2400, יפן) ו-Video מסגרת חוטף הותקנו כדי ללכוד את האות בעוצמה נמוכה בשיעור בזמן אמת וידאו (30 מסגרות לשנייה). תמונות נרשמו ב-DVD כמו קבצי וידאו. </li></ol> גירוי שרירים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פולס חשמלי נוצר באמצעות גירוי העצבים ההיקפית (Innervator 252, Fisher &amp; Paykel בריאות, ניו זילנד), ונמסרו משטח השריר באמצעות בדיקה חלד מצופה. סוף בדיקה מינוס הושם על החלק הפרוקסימלי של שרירים סוף פלוס הושם על החלק הדיסטלי של שריר. גירויים טטנוס ניתנו בקצב של 50Hz למשך 5 שניות. גירויים חשמליים לא לגרום לנזק ישיר על myofiber בקרבת אזור המגע. </li></ol> RBC ניתוח השטף <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוקלט תמונות וידאו DVD הועברו קבצי וידאו סאוואנט תמונה באמצעות תוכנת מסגרת חוטף (וידאו סאוואנט, ארה&quot;ב). תמונות וידאו נבדקו מהירות מותאם כדי להמחיש RBC מוכתם בודדים. RBC השטף נמדד על ידי ספירת RBC, אשר טס דרך עורקיק ראשוני ממוקד לדקה. </li></ol>

<ol><li>Lichtman, J. W., Magrassi, L., Purves, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+neuromuscular+junctions+over+periods+of+several+months+in+living+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Visualization of neuromuscular junctions over periods of several months in living mice.</a> J Neurosci. 7, 1215-1222 (1987).</li>
</ol>

כל הנהלים הקשורים בניסויים בבעלי חיים היו נבדקה ואושרה על ידי ועדת המשנה על טיפול בבעלי חיים למחקר של בית החולים הכללי במסצ&#39;וסטס.

Techinical נקודות חשובות הן כדלקמן: (1) תחזוקה של המצב הפיזיולוגי של החיה (, אוורור pH של הטמפרטורה פתרון perfusative, גוף), (2) נפח הזרקה של RBC מוכתם, ו (3) התנאים תצפית (עדשה אופטימלי , בחירת עוצמת הקרינה). יישומים עתידיים אפשריים הם כדלקמן: (א) בשילוב עם התערבויות ביולוגיות pharmacophysiological ו / או המולקולרית, (ב) לטווח ארוך תצפית של עורקים / arteriolo טרשת ו-neovascularization.

<table><tbody><tr><td>צבע PKH26 </td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>551/567 nm; ערכה לקישור תאים פלואורסצנטיים בצבע אדום</td></tr><tr><td>עכברי C57BL/10 </td><td>בעל חיים</td><td></td><td></td><td>זכרים בני שלושה עד שישה חודשים</td></tr><tr><td>פנטובריטול </td><td></td><td></td><td></td><td>חומר הרדמה, 50mg/kgBW, i.p.</td></tr></tbody></table>

במדידה micro-vivo מחזור בשרירי השלד על ידי מיקרוסקופית תוך חיוני

In vivo Micro-circulation Measurement in Skeletal Muscle by Intra-vital Microscopy

רקע: גורמי רגולציה ופיזיולוגיה מפורט ב microcirculation vivo נותרו לא הבהיר באופן מלא לאחר שיטות שונות של הדמיה המציא. בעוד פרמטרים רבים מקרוסקופית של זרימת הדם לשקף מהירות זרימה, שינויים מהירות זרימת הדם ואת כדוריות הדם האדומות (RBC) השטף אינו מחזיק קשר לינארי בין תצפיות מיקרוסקופיות. ישנם דיווחים של אי התאמה בין מהירות RBC RBC שטף, השטף RBC ונפח הפלזמה זרימה של הטרוגניות במרחב ובזמן של ויסות זרימת ברקמות הפריפריה תצפיות מיקרוסקופיות, בסיס מדעי הדרישה של מחקרים מפורטים יותר בתקנה microcirculatory באמצעות intravital במיקרוסקופ. שיטות: שיטה שונה של ג&#39;ף ליכטמן של בהתבוננות מיקרוסקופית vivo של השרירים sternomastoid העכבר. עכברים מורדמים, מאוורר, והזריקו עם PKH26L-fluorescently RBCs שכותרתו להסתכלות מיקרוסקופית. התוצאה &amp; מסקנות: RBCs שכותרתו fluorescently מזוהים ומכובדת היטב על ידי מיקרוסקופ שדה רחב. התכווצות שרירים שעורר להגדיל גירוי חשמלי המושרה RBC השטף. כימות הפרמטרים האחרים לרבות מהירות RBC וצפיפות נימי היו ריאלי. עכברים נסבל היטב את הניתוח, הזרקת RBCs מוכתם, תצפית מיקרוסקופי, גירוי חשמלי. שריר לא נזק או כלי דם נצפתה, טוען כי השיטה שלנו הוא יחסית פחות פולשני מתאים לטווח ארוך תצפיות.

שיטה צדדי חדש להסתכלות של microcirculation מוצג. זה נחשב מתאים תצפית ארוכת טווח, ועל בשילוב עם התערבויות ביולוגיות pharmacophysiological או המולקולרית.

במדידה Micro-vivo מחזור בשרירי השלד על ידי מיקרוסקופית תוך חיוני

רקע: הגורמים הרגולטוריים והפיזיולוגיה המפורטת של מיקרו-סירקולציה (מיקרו-זרימה) בתוך הגוף (in vivo) לא הובהרו במלואן לאחר שימוש במגוון שיטות שונות של...

שלום, שמי אקי, חוקר בבית הספר לרפואה של הרווארד ובבית החולים הכללי של מסצ'וסטס. ביומן וידאו זה, אציג שיטה חדשה למיקרוסקופיה in vivo. באמצעות טכניקה זו, אנו יכולים למדוד זרימת דם כמותית בהפרשות מיקרוסקופיות.מטרת הניסוי שלנו היא לבסס מערכת למדידה רציפה של הפרשה מיקרוסקופית in vivo. תכננו את הפרויקט הזה כדי להמחיש את זרימת הדם ברמת הנימיים ובחלקים הקדמיים של שרירים בבעל חיים חי תחת המיקרוסקופ; בהשוואה לשיטות קונבנציונליות למדידת יונים in vivo, כגון אולטרסאונד של הדם או מתח חמצן, שיטה זו תאפשר מדידה של פרמטרים מרובים של זרימת הדם, דהיינו שטף תאי דם אדומים או מהירות זרימה וזרימת פלסמה. מדידה של פרמטרים אלו תחשוף שינויים במיקרו-סירקולציה בפירוט רב יותר.לאחר מכן, השיטה שלנו יושמה לזיהוי שינויים בזרימת הדם בתגובה לגירוי פיזיולוגי ברקמות שריר חיות. השיטה שלנו פשוטה יותר ופחות פולשנית ממיקרוסקופיה קונבנציונלית in vivo, כך שהשרירים נגישים באופן ישיר ויכולנו להחיל גירוי פיזיולוגי חשמלי על שרירי עכבר ולתאר את התגובה המפורטת של זרימת הדם לכיווץ השריר. הרדמה כללית חומרה באמצעות sodium pentobarbital.השיער מהצוואר הוסר באמצעות קרם דפילציה. הכנסו פחית סימון (endotracheal tube). חברו למנשם מכני בתוך הצוואר.חשוף את השריר הסטרינו-מסטואיד של העור. החזק את מסת השריר הסטרינו-מסטואיד שהונחה על פד בקרה של ט

in-vivo-micro-circulation-measurement-skeletal-muscle-intra-vital

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

מיקרוסקופיה Intravital לעקוב אחרי האירועים hemodynamic ו דלקתיות ומרחב ב microcirculation pial.

מיקרוסקופית Intravital של microcirculation המוח עכבר באמצעות חלון גולגולתי סגור

שכבת פני שטח glycocalyx / אנדותל האנדותל היא למד באופן אידיאלי באמצעות מיקרוסקופ intravital. מיקרוסקופיה Intravital טכני מאתגרת באיבר מרגש כגון ריאות. אנחנו מדגימים איך brightfield סימולטני ומיקרוסקופיה ניאון ניתן להשתמש כדי להעריך את עובי שכבת פני שטח האנדותל שבנע...

במדידת vivo של שכבת פני שטח האנדותל ריאתי המאוסה

במאמר זה, אנו מציגים שיטה לניתוח microvessels גידול in vivo באמצעות videomicroscopy הקרינה משופרת ניגודיות דינמי. שני פרמטרים כמותיים נרכשו: צפיפות תפקודית נימים המשקפת את כלי הדם של הגידול, וזליגת מדד המשקפת את הדליפות של קיר אנדותל.

בהדמית vivo של אנגיוגנזה גידול באמצעות הקרינה Confocal Videomicroscopy

מיקרוסקופיה Intravital של זרימת דם Cremaster העכבר מ 'מציעה ייחודית וסטנדרטיזציה גם במודל vivo לניתוח נדידת תאי גזע של מח עצם היקפי.

מיקרוסקופית Intravital של זרימת הדם בשריר העכבר Cremaster לניתוח של נדידת תאי גזע היקפי

מאמר זה מדווח על שיטה מפורטת למדידה דינמית וכימות של מהירות זרימת הדם בתוך כלי דם בודדים של כלי הדם בכבד העכבר באמצעות הדמיית מיקרוסקופיה תוך-חיונית בשילוב עם מתודולוגיה ספציפית לרכישת וניתוח תמונה.

מיקרוסקופית Intravital הדמיה של הכבד הבא<em&gt; שושנת יריחו</em&gt; זיהום: הערכה של פרמטרים המודינמיים בדיה

שיטה זו מתארת את השימוש בטומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת קוונטית (MicroCT) כדי להעריך את המורפולוגיה הלבבית, התפקוד, הזלוף, חילוף החומרים והכדאיות עם חומר ניגוד יוד בעכברים עם איסכמיה של שריר הלב המושרה בניסוי. ניתן ליישם את הטכניקה להדמיה אורכית לא הרסנית בתפוקה גבוהה in vivo של מודלים שונים של בעלי חיים של מחלות לב אנושיות.

In vivo כמותי הערכת מבנה שריר הלב, תפקוד, זלוף ואת הכדאיות שימוש טומוגרפיה לב מיקרו שחושב

Vasodilation הנוצרות על-ידי אינסולין מווסת את השריר זלוף ומגביר את microvascular על פני השטח אזור (גיוס microvascular) זמין לחילופי ממס בין interstitium דם ורקמות. מיקרוסקופ intravital משולב, בדיקת אולטרה סאונד משופרת לעומת זאת מוצג להעריך בו זמנית של אינסולין פעולה בכל כלי גדול יותר, את microcirculation ויוו.

משולב מיקרוסקופ Intravital משופרת לעומת זאת בדיקת אולטרה סאונד של Hindlimb העכבר ללמוד Vasodilation הנוצרות על-ידי אינסולין זלוף שריר

Videomicroscopy מערכות משמשות כדי לבחון מאפיינים פונקציונליים של רקמת שומן מבודדת רבים בתגובה לגירויים פיזיולוגיים ולא תרופתי. טכניקה זו ניתן לבחון פנוטיפים microvascular בתחומים שונים רקמת שומן בבני מהשמנת יתר.

הערכה של רקמת שומן אנושי הפונקציה Microvascular באמצעות Videomicroscopy

כאן, אנו מתארים גישה פשוטה, לא פולשנית באמצעות ספקטרוסקופית אינפרא אדום כדי להעריך hyperemia תגובתי, נוירו-וסקולריים צימוד וקיבולת חמצוני שרירי השלד, ביקור במרפאה או מעבדה בודד.

צימוד נוירו-וסקולריים שרירי השלד, קיבולת חמצוני, ופועלים Microvascular עם 'אחד עצור חנות' ספקטרוסקופיית אינפרא אדום

הפרוטוקול הנוכחי מתאר פרטים ניסיוניים תמציתיים על הערכה ופרשנות של נתוני מומנט in vivo המתקבלים באמצעות גירוי חשמלי של העצב הפרונאלי הנפוץ בחזירים מורדמים.

In Vivo מדידת מומנט איזומטרי של הינדלימב דורסיפלקסור מחזיר

ניתן להשתמש במיקרוסקופיה פלואורסצנטית תוך-ורידית כדי לחקור אינטראקציות לויקוציטים-אנדותל וזלוף נימי בזמן אמת. פרוטוקול זה מתאר שיטות לדמות ולכמת פרמטרים אלה במיקרו-סירקולציה ריאתית באמצעות מערכת הדמיית ריאות המיוצבת בריק.

מיקרוסקופיה פלואורסצנטית תוך-ורידית של מיקרו-סירקולציה ריאתית בפגיעה חריפה ניסיונית של הריאות באמצעות מערכת הדמיה מיוצבת ואקום

למד שיטת מיקרוסקופיה תוך חיונית למדידת זרימת דם במיקרו-מחזור בשרירי שלד. טכניקה זו מאפשרת תצפית ארוכת טווח ומדידה כמותית של פרמטרי זרימת דם ברמת הנימים.

במדידה Micro-vivo מחזור בשרירי השלד על ידי מיקרוסקופית תוך חיוני

גלה סרטונים נוספים