Name: הצמד תיקון הקלטות מתא עצב עכבר רשתית בהכנת Dark המותאמות פרוסה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-09-12T19:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 38 s
Description: למדו הכנת פרוסות רשתית מותאמות חושך בעכברים לרישום אלקטרופיזיולוגי. שיטה זו מאפשרת חקר מסלולי העברת אותות בתאי הרשתית בתגובה לגירוי אור.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי NIH גרנט EY17606 (APS).

1. הכנת אלקטרודות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את האלקטרודות הקלטה הפניה על ידי טבילה שניהם NaCl 1M ונהיגה 15V ביניהם באמצעות גל סינוס 1 הרץ עבור ~ 20 שניות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך את האלקטרודות הקלטה באמצעות חולץ micropipette (סאטר מכשירי P-97). עבור תיקון-pipettes להשתמש בורוסיליקט זכוכית בקוטר חיצוני של 1.2 מ"מ ו בקוטר הפנימי של 0.69 מ"מ (סאטר מכשירים, חתול # B120-69-10). מדוד את התנגדות סדרה דרך קצה האלקטרודה. בהתבסס על גודל התאים היעד לבחור קוטר קצה פיפטה, עבור גופי התא ~ 20 מיקרומטר להשתמש בקוטר 5 ~ MΩ עבור גופי התא ~ 5 מיקרומטר להשתמש בקוטר ~ 12 MΩ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת הקרקע / אלקטרודות התייחסות. באמצעות מזרק למלא קטע קטן צינורות פוליאתילן (Intramedic, PE205) עם 1 mM NaCl הכוללת אגר 3.5% (Sigma, חתול # A7002) ב NaCl 1M. המקום הזה אגר גשר מעל אלקטרודת Ag / AgCl ההתייחסות. </li></ol> 2. הכנת פתרונות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אמבטיה פתרון חיצוני, "מדיה המכילה ביקרבונט (1 ליטר): 1 בקבוק איימס איימס בינוני (Sigma, חתול # A1420), 1.9 גרם של NaHCO 3, 7 מ"ל של סטרפטומיצין, פניצילין (Sigma, חתול # P0781) כדי למנוע חיידקים צמיחה. התאם osmolarity כדי mOsm 280 ~. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חיתוך פתרון, "מדיה המכילה את מאגר ה-pH HEPES (1 ליטר): 1 בקבוק איימס איימס בינוני, 0.887 גרם של NaCl, 2.38 גרם של HEPES, 7 מ"ל של סטרפטומיצין, פניצילין. התאם את ה-pH ל ~ 7.4 באמצעות 1M NaOH ו / או 1M HCl. התאם osmolarity כדי mOsm 280 ~. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אשלגן-Aspartate (K-ASP) פתרון פיפטה פנימי (מ"מ): 125-K-Aspartate, KCl 10, 10 HEPES, 5 NMG-HEDTA, 0.5 CaCl 2, 1-ATP מ"ג, 0.2 מ"ג GTP; pH מותאם ~ 7.3 עם NMG-OH, ו osmolarity מותאם mOsm 280 ~. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבלימת הכדור אגר לייצוב טמפרטורה נמוכה gelling agarose המכיל את הרשתית (5% לפי משקל), 7.5 גרם של אגר (Sigma, חתול # A7002) נמס 150 מ"ל של DH 2 O. </li></ol> 3. יום של הניסוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפשירי ~ 1.5 מ"ל של פתרון פנימי K-ASP ו fluorophore על פי בחירתך מהמקפיא. לדלל את fluorophore לריכוז המתאים, אשר יש לקבוע באופן אמפירי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצקים התקשורת "איימס המכיל NaHCO 3 (~ 200 מ"ל) לתוך מיכל אור חזק האחסון ולאחר מכן למקם לאמבטיה מים (30-32 ° C) לאזן עם 5% CO 2 / 95% O 2 גז </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלאו בקבוק עם 110 מ"ל ~ של התקשורת "איימס המכיל HEPES, במקום על קרח לאזן עם 100% O 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את שאר כלי התקשורת "איימס המכיל NaHCO 3 במאגר מחומם על גבי כלוב פאראדיי, והוא לאזן עם 5% CO 2 / 95% O 2 גז. Parafilm ניתן להשתמש כדי ללכוד את הגז בחלל מעל הפתרון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את הטמפרטורה הנמוכה gelling agarose (3%) על ידי הוספת 0.75 גרם (Sigma, חתול # A0701) ל 25 מ"ל של התקשורת "איימס עם HEPES והפתרון חום ~ 115 ° C כדי להמיס את agarose. מערבבים עד הפתרון ברור ללא בועות, ולאחסן באמבט מים (~ 42 ° C). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלאו פיפטה הקלטה עם פתרון K-Asp הפנימי לבדוק את קצה ההתנגדות. </li></ol> 4. בגין הניסוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר במהירות להסיר את העיניים בעזרת מספריים מעוקל. משקפי אינפרא אדום אמור לשמש עבור כל ההליכים כדי למנוע הלבנת של פיגמנט הראייה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את עיניו על פיסת נייר סינון כדי למנוע מהם להתגלגל, באמצעות להב דק דו צדדי, לבצע חתך בקרנית בעוד מחזיק את העין עם מלקחיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע את גלגל העין הוא ניקב, העברת הם העין לתוך צלחת מלא עם התקשורת "איימס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות חתך בקרנית כנקודת כניסה, מספריים קטנים המשמשים לחתוך את החלקים הנותרים של הקרנית, לאחר מכן את העדשה זגוגי ניתן להסירו. היזהר כי הרשתית נשאר מחובר עיינית, ולאחסן את עיינית בחושך ב 32 ° C בתקשורת equilibrated עם 5% CO 2 / 95% O 2 "איימס. </li></ol> 5. פלוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Hemisect אחד eyecups ו לנתק את הרשתית של אפיתל הפיגמנט ברשתית. הסר את הקצוות של הרשתית, כדי לאפשר לרקמות לשכב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בכוס קטנה פיפטה פסטר עם נורת לטקס למלא צלחת פטרי 35 מ"מ עם אגר מומס, וגרור את פני באמצעות מלקחיים אגר כדי לבדוק עקביות שלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר אתה יכול להתחיל לראות אגר לחזק: <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את הרשתית לחלק העליון של אגר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש חתיכת מעוות של Kimwipe לספוג את הפתרון עודף סביב הרשתית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקום 2-3 טיפות של אגר ישירות על גבי הרשתית במהירות למקום גליל פלסטיק על הרשתית להקים גדר מסביב. ואז לטפטף אגר נמס נוסף לצדי גליל הפלסטיק תוך מרכוז הרשתית בתוך אגר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את צלחת פטרי to מי קרח אמבטיה להתקרר. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר ~ 45 שניות להסיר את הרקמה מן הרחצה במי קרח ולהשתמש הבוכנה כדי extrude אגר לחסום מתוך גליל הפלסטיק, דוחפים מהצד הרחוק ביותר מן הרשתית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בלהב חד צדדי גילוח לחתוך את גוש קטן של אגר המכיל את הרשתית ואת הדבק את הבלוק למקום נגד גדר המגרש אגר בדיסק הדגימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת את הדיסק הדגימה למגש microtome רוטט ויוצקים קרים HEPES איימס למגש המאפשר לחסום עם הרשתית להיות טבלו מלא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רשתית פרוסות בעובי של ~ 200 מיקרומטר ניתן לחתוך בשיעור המרבי להב רוטט ומהירות להב קדימה סט כזה, כי זה לוקח 4-5 שניות כדי לחתוך דרך הרשתית על כל פרוסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש להב 11 מס 'אזמל כדי להסיר כל פרוסה אחת שמיש בכל פעם </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פרוסות טוב המכיל ברשתית ממוקמים לתאי הקלטה משוקללים למטה עם עוגנים פרוסה עם חוטי ניילון מעבר להם. חוטי ניילון החזק את אגר המקיפים את הרשתית, משאירים את הרשתית בלא הפרעה עבור הקלטות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברה לתא הקלטה לשלב של המיקרוסקופ זקוף, לסגור את הווילון להפעיל את מקור האור האינפרא אדום כדי להציג את הפרוסה על מצלמת אינפרא אדום רגיש. </li></ol> 6. הקלטה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר פרוסת רשתית טוב (עם photoreceptors שלם זווית חיתוך מתאים) מזוהה להתחיל המרוססת הרשתית בשיעור של יותר מ -5 mL / min עם התקשורת איימס "כי מחומם מחוממת 35 37 ° C ו equilibrated עם 5% CO 2 / 95% O 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כמה נזק משטח עשוי להיות ניכר, בשל תהליך חיתוך. שכבה זו של תאים דקה בדרך כלל ניתן להסיר בעזרת פיפטה עם קצה שבור, בעדינות למצוץ ממנו את גופי התא מת. זה יהיה בדרך כלל חושפים תאים חיים מתחת. זהה את גוף התא בריא שמעמדם נמצא בשכבות של עניין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מילוי micropipette עם פתרון הפנימי KAsp ולהפעיל לחץ חיובי (החוצה) דרך קצה פיפטה, ולהפחית את קצה פיפטה החדרה הקלטה עד לרמת התא באמצעות micromanipulator. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את קצה פיפטה כזאת שזה הגומות של קרום התא, ולהחיל עדין לחץ שלילי (פנימה) כדי להפוך את חותם עמידות גבוהה. שלמות התא במצב יכולה להיות מושגת על ידי הפעלת לחץ שלילי על האלקטרודה לפרוץ לתוך התא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מגרה את רקמת הרשתית באמצעות נוריות אז יכול לעורר תגובות לאור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צילום התא שממנו ההקלטה נעשתה על ידי לעורר הקרינה מן fluorophore בפתרון טפטפת פנימית. </li></ol> 7. נציג תוצאות <img src="/files/ftp_upload/2107/2107fig1.jpg" alt="איור 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> באיור 1. כאן, אור עורר הפוטנציאלים של אפל המותאמות נוירון הרשתית אל הבזקי אור של כוח הגדלת מוצגים. <img src="/files/ftp_upload/2107/2107fig2.jpg" alt="איור 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 2"> איור 2. תמונה הקרינה מן פרוסת ברשתית שבו התאים היו מלאים fluorophore, לוציפר צהוב. הקרינה עורר מראה את המורפולוגיה של תאים שמהם הקלטות תיקון נעשו.

<ol><li>Weblin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmission+along+and+between+rods+in+the+tiger+salamander+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Transmission along and between rods in the tiger salamander retina.</a> J Physiol. 280, 449-470 (1978).</li>
<li>Wu, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+connections+among+retina+neurons+in+living+slices%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Synaptic connections among retina neurons in living slices.</a> J Neurosci Methods. 20, 139-149 (1987).</li>
<li>Rieke, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+contrast+adaptation+in+salamander+bipolar+cell%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Temporal contrast adaptation in salamander bipolar cell.</a> J Neurosci. 21, 9445-9454 (2001).</li>
<li>Armstrong-Gold, C., &amp, R. ieke, F, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bandpass+filtering+at+the+rod+to+second-order+cell+synapse+in+salamander+%28Ambystoma+tigrinum%29+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Bandpass filtering at the rod to second-order cell synapse in salamander (Ambystoma tigrinum) retina.</a> J Neurosci. 23, 3796-3806 (2003).</li>
<li>Masland, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fundamental+plan+of+the+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The fundamental plan of the retina.</a> Nat Neurosci. 4, 877-886 (2001).</li>
<li>Wassle, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+processing+in+the+mammalian+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Parallel processing in the mammalian retina.</a> Nat Rev Neurosci. 5, 747-757 (2004).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

הקלטה פורסים מן הרשתית חוליות נעשו במשך עשרות שנים 1,2, ואת כבר די מוצלח במתן הבנה עמוקה יותר של האופן שבו המעגלים רשתית מקודד אור התקרית. היתרונות של חיתוך עם microtome רוטט ולא ישירות עם סכין גילוח היא פרוסות רשתית להיגרם נזק פחות על פני השטח. עם טפטפת יניקה קל להסיר נזק לתאים בריאים היעד מתחת לפני השטח, כי לשמור על קישוריות שלהם במעגל הרשתית, שם רוב סוגי תאים זוהו 5,6, וכי התגובות חזקים להציג לאור. כך מהדק תיקון הקלטות כהה מותאם פרוסות רשתית יכולה להרשות ח...

<table><tbody><tr><td>מכשיר למשיכת מיקרופיפטות</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td>P-97</td><td></td></tr><tr><td>זכוכית בורוסיליקט</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td>B120-69-10</td><td></td></tr><tr><td>צינוריות פוליאתילן</td><td>Intramedic</td><td>PE205</td><td></td></tr><tr><td>אגר</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7002</td><td></td></tr><tr><td>אגרוז בטמפרטורת ג'ל נמוכה</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A0701</td><td></td></tr><tr><td>מצע Ames&amp;rsquo;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A1420</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומייסין</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P0781</td><td></td></tr></tbody></table>

הצמד תיקון הקלטות מתא עצב עכבר רשתית בהכנת dark המותאמות פרוסה

Patch Clamp Recordings from Mouse Retinal Neurons in a Dark-adapted Slice Preparation

החוויה החזותית שלנו היא יזמה כאשר הפיגמנט חזותית קולטני האור ברשתית שלנו סופג אנרגיה של פוטונים אור יוזם מפל של אירועים תאיים שמובילים סגירת מחזורית-נוקלאוטיד-מגודרת תעלות בקרום התא. השינוי וכתוצאה מכך פוטנציאל קרום מוביל בתורו להפחתה בסכום של שחרור הנוירוטרנסמיטר מן המוט וגם מסופי חרוט הסינפטי. כדי למדוד כיצד לשנות אור עורר בפוטנציאל הממברנה photoreceptor מוביל פעילות הזרם ברשתית, הצליחו המדענים הקלטות אלקטרו מן ההכנות פרוסה רשתית עבור 1,2 עשורים. בעבר פרוסות אלה קוצצו באופן ידני בסכין גילוח על רקמת הרשתית המצורפת נייר מסנן: בשנים האחרונות שיטה אחרת של חיתוך פותחה לפיה רקמת הרשתית מוטבע אגר gelling נמוך הטמפרטורה פרוס פתרון מגניב עם רוטט microtome 3,4. הכנה זו מייצרת פרוסות רשתית עם נזק משטח פחות ותגובות אור עורר מאוד חזקים. כאן אנו מסמך כיצד הליך זה יכול להתבצע תחת אור אינפרא אדום, כדי למנוע הלבנת הפיגמנט חזותית.

כאן אנו מתארים את הליך להפקת כהה מותאם פרוסות של הרשתית העכבר על הקלטות אלקטרו.

הצמד תיקון הקלטות מתא עצב עכבר רשתית בהכנת Dark המותאמות פרוסה

החוויה החזותית שלנו מתחילה כאשר הפיגמנט החזותי בפוטורצפטורים הרשתית שלנו סופג פוטונים של אנרגיית אור ומפעיל שרשרת של...

החוויה החזותית שלנו מתחילה כאשר הפיגמנט החזותי בפוטורצפטורים של הרשתית סופג פוטונים של אנרגיית אור, מה שמוביל בסופו של דבר לסגירה של תעלות המופעלות על ידי נוקלאוטיד ציקלי בממברנת התא. פעולה זו מדכאת את שחרורו של הנוירוטרנסמיטר glutamate הן מהמקלות והן מהקונוסים. ה-glutamate המשוחרר מזוהה על ידי תאי רשתית במורד המסלול כדי לחקור את האותות הבאים לאחר מכן.העיניים מוסרות מעכבר שהורדם. ה-S מבודלים, מוטמעים בבלוק אגר ונחתכים באמצעות מיקרוטום רוטט. לאחר מכן, פרוסות הרשתინა מונחות תחת מיקרוסקופ ועוברות גירוי באמצעות תאורת LED.בזמן זה מתבצעות הקלטות patch clamp למדידת הזרמים או הפוטנציאלים הסינפטיים הנוצרים. בדרך כלל, אנשים שאינם מכירים את השיטה יתקשו בביצועה בשל המורכבויות הנוספות הכרוכות בעבודה בחשיכה. לכן, היכולת להמחיש את התהליך כולו תעניק תחושה שקשה לתאר בדרכים אחרות.התחילו את הפרוצדורה על ידי ציפוי אלקטרודות תיל ההקלטה והייחוס שבהן תשתמשו בשכבה של כסוף כלוריד. טבלו את האלקטרודות בנתרן כלוריד בריכוז 1 M. לאחר מכן, באמצעות מקור מתח של 15 volt עם גל סינוס בתדר של 1 hz, העבירו ביניהן מתח של 15 volt למשך כ-20 שניות.באמצעות מכשיר למשיכת מיקרו-פיפטות, הכין פיפטות ל-patch מזכוכית סיליקה BO שעברה ליטוש באש, תוך בחירת התנגדות של קצה הפיפטה בהתאם לגודל תאי המטרה עבור גופי תא בקוטר של כ-20 מיקרון.

patch-clamp-recordings-from-mouse-retinal-neurons-dark-adapted-slice

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

וידאו זה מציג את התהליך של כל תא מהדק הקלטות מתח הפרוסה הרשתית של נמר מימיים סלמנדרה. אנו מדגימים את הכנת הפרוסה וכן כיצד לבצע הקלטות מהדק תיקון במהלך גירוי ויזואלי של הרשתית.

שלמות התא הקלטות של אור עורר זרמים Synaptic מעוררים פורסים את רשתית

מאמר זה מספק תיאור של איך לנתח ולתעד מן ההכנה רשתית מבודד העכבר. בפרט, אנו מתארים כיצד לרשום בתגובות אור אוכלוסייה שכותרתו fluorescently תא הגנגליון ובהמשך לזהות ולנתח את המורפולוגיה שלה.

הכנה רשתית מבודד להקליט תגובה האור תווית גנטית לתאי הגנגליון ברשתית

כאן אנו מתארים פרוטוקול להכנת אגר, מוטבע פרוסות רשתית המתאימים electrophysiology ו Ca2 + הדמיה. שיטה זו מאפשרת ללמוד סרט מסוג הסינפסות microcircuits הרשתית באמצעות תיקון ישיר, מהדק הקלטות של אחד מסופי העצב presynaptic.

Patch-clamp מדידות קיבול ו Ca 2 + הדמיה על מסופי עצב יחיד ב Slices רשתית

אנו מתארים שיטה פשוטה יחסית של transretinal electroretinogram (ERG) הקלטות להשגת photoresponses מוט חרוט מן הרשתית העכבר ללא פגע. גישה זו מנצלת את הבלוק של הולכה סינפטית מ photoreceptors לבודד תגובות אור שלהם ולהקליט אותם באמצעות אלקטרודות המונחות על פני שטח הרשתית שטוח רכוב מבודד.

Transretinal ERG הקלטות של רשתית עכבר: רוד Photoresponses חרוט

סרטון זה מדגים טכניקת מהדק טלאי של תא שלם להקלטה אלקטרופיזיולוגית מרשתית עכבר שטוחה. פיפטת זכוכית דקה עם אלקטרודה משמשת להתקרבות לתאים אמקריניים מתפוצצים בכוכבים (SACs) בתוך הרשתית. לאחר יצירת חותם, היניקה מוחלת כדי לקרוע את הממברנה וליצור את תצורת מהדק טלאי התא כולו. לבסוף, זרימת היונים דרך קולטני SAC סינפטיים נמדדת באמצעות התצורה.

הקמת מהדק טלאי לכל התא להקלטה אלקטרופיזיולוגית מרשתית עכבר שטוחה

סרטון זה מדגים הקלטה של תגובות פוסט-סינפטיות מעוררות אור בהכנת פרוסת רקמת רשתית עכבר מותאמת כהה. פרוסת הרשתית ממוקמת בתא הקלטה, ופיפטת הקלטה משמשת ליצירת רצף חשמלי עם תא גנגליון רשתית. פולסי אור מוחלים כדי ליצור פוטנציאלים פוסט-סינפטיים מעוררים בתאי הגנגליון, אשר נרשמים על ידי פיפטה.

תגובות פוסט-סינפטיות מעוררות אור בתאי עצב של פרוסות רשתית עכבר

אנו מתארים את ההכנה של פרוסות רשתית דקות ממימיות נמר סלמנדרות...

כל תא הקלטות בו זמנית מקולטני אור ועל נוירונים מסדר שני בהכנה פורסים רשתית אמפיבי

מאמר זה וידאו מדגים את ההגדרה, את ההליכים לתיקון גופי תא וכיצד ליישם את הקלטות מהדק דינמיות מתאי הגנגליון בכל הר עכבר רשתיות. טכניקה זו מאפשרת החקירה של התרומה המדויקת של תשומות סינפטיים מעוררות ומעכבות, ואת העצמה היחסית והעיתוי שלהם לspiking העצבי.

יישום קלאמפ דינמי עם Conductances Synaptic ומלאכותי בתאי עכבר גנגליון רשתית

נדגים כיצד להכין פרוסות רשתית מעין העכבר ולתעד תגובות אור בתאי עצב ברשתית. ההליך כולו מתנהל בתנאים מותאמים לחושך.

הקלטת אור עורר תגובות Postsynaptic בנוירונים מותאמים-Dark, תכשירי עכבר רשתית Slice באמצעות טכניקות הצמד התיקון

פרוטוקול זה מדגים כיצד לבצע הקלטת תיקון מהדק כל תא על נוירונים ברשתית מן הכנת שטוח הר.

צמד תיקון הקלטה של ​​תאי הקרנות amacrine בתוך הכנת שטוח הר Deafferentated רשתית העכבר

פתחנו תכשיר חתך אופקי של הרשתית היונקת הבוגרת עם המטוס של חתך במקביל לפני שטח הרשתית. שדות דנדריטים של נוירונים ברשתית אוריינטציה nonradially לא היו מקוצץ, המאפשר חקר עיבוד אותות עם טכניקות תיקון- clamp והדמיה.

הכנת פרוסות אופקיות של רשתית למבוגרים עכבר עבור אלקטרו מחקרים

למדו הכנת פרוסות רשתית מותאמות חושך בעכברים לרישום אלקטרופיזיולוגי. שיטה זו מאפשרת חקר מסלולי העברת אותות בתאי הרשתית בתגובה לגירוי אור.

הצמד תיקון הקלטות מתא עצב עכבר רשתית בהכנת Dark המותאמות פרוסה

גלה סרטונים נוספים