Name: הזרקה תוך גולגולתי של Adeno הקשורים וקטורים ויראליים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-11-17T18:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 47 s
Description: למד הזרקה תוך גולגולתית של וקטורים ויראליים מסוג AAV לסימון פלואורסצנטי של נוירונים ותאי גליה בקורטקס הראייה. שיטה זו מאפשרת מעקב אחר תאים מתויגים בחי ומציעה חלופה חסכונית לקווי עכברים טרנסגניים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

עבודה זו התאפשרה על ידי מענק מ-NIH (EY012977), פרס קריירה במדעי ביו מן Wellcome בורוז קרן, קרן וייטהול, קרן סלואן (AKM).

1. וירוס טיפול ואחסון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגנה נכונה טכניקות הטיפול יש לבחור בהתבסס על רמת בטיחות ביולוגית של הנגיף לשמש. שיטות אלה ניתן למצוא biosafety במהדורה מיקרוביולוגי ביו 5 th מעבדות, באתר האינטרנט של ה-CDC ( <a href="http://www.cdc.gov/od/OHS/biosfty/bmbl5/bmbl5toc.htm">http://www.cdc.gov/od/OHS/biosfty/bmbl5/bmbl5toc.htm</a> ). השימוש וקטורים AAV מאושר biosafety רמה 1 (BSL-1). לצורך הניסוי שמוצג כאן, חלוק מעבדה וכפפות יהיה שחוק כאשר טיפול וירוס, בהתאם לנהלים לטיפול BSL-1 סוכנים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לשמר את הפעילות של הנגיף עדיף לחלק אותו aliquots קטן כדי למנוע הקפאת חוזרות הפשרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן הקבינט biosafety (BSC) Class II עבור aliquoting וירוס ידי ניקוי BSC של חפצים מיותרים לחיטוי את פני השטח עם EtOH 70%. מניחים כוס המכילה פתרון אקונומיקה 10% למכסה המנוע לאיסוף AAV-מזוהמים בפסולת. להציב גם BSC הם צינורות 0.5mL סטרילית מיכל של קרח יבש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפשירי מניות ויראלי על הקרח מחוץ BSC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> וורטקס הנגיף ופתח את הצינור הפנימי BSC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה נפח aliquot הרצוי (למשל 5 μL) לתוך צינור 0.5mL, לסגור את הצינור ולשים אותו בקרח יבש יקפיא את הנגיף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר כל וירוס כבר aliquoted, להיפטר הצינור וירוס טיפים פיפטה במיכל פסולת המכילה אקונומיקה 10%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את מיכל הפסולת מכסה המנוע להוסיף אקונומיקה 10% נוספים, ואז לשפוך אקונומיקה בכיור. השליכו פסולת פלסטיק במיכל Biohazard כפי שהורה הקצין מכון שלך biosafety. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה כל ציוד או משטחים כי בא במגע עם הנגיף עם אקונומיקה 10%. בטל כפפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חנות aliquots למקפיא -80 מעלות צלזיוס. </li></ol> 2. כירורגיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכסים את אזור הניתוח עם נייר סופג מעבדה הספסל. כלים כירורגיים צריך להיות מעוקר ניתוח נעשה בתנאים aseptic בהתאם biosafety המוסד שלך והנחיות לשימוש בבעלי חיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר אזור הסמוך לאזור כירורגית אשר יוקדש טעינת micropipettes בווירוס, ולכסות עם נייר סופג מעבדה הספסל. הצב aliquot של הנגיף במיכל קרח באזור זה, ולאפשר הנגיף להפשיר על הקרח כמו הניתוח מתבצע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדרת מיכל פסולת של 10% אקונומיקה באזור וירוס ייעודי לטיפול עבור סילוק טיפים פיפטה, וכו &#39;כי בא במגע עם הנגיף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך micropipette Wiretrol זכוכית בקוטר טיפ של כ 20 מיקרון. המקום טיפה קטנה של שמן מינרלי בקצה הקהה של micropipette והכנס את הבוכנה חוט מסופק עם micropipettes. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אבטח את micropipette בתוך מלחציים של הזרוע micropump. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק עכבר תת עורי עם עצירות במינון של 0.5 מ&quot;ג / ק&quot;ג. להרדים את העכבר עם Avertin באמצעות הזרקה intraperitoneal עם מינון של 200 מ&quot;ג / ק&quot;ג ולהסיר את השיער מהחלק העליון של הראש עם מספריים כירורגיות, מוודא להשאיר שוליים גדולים מספיק כדי למנוע שיער מלהיכנס את החתך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף שמיכה חימום לבסיס stereotax לשמור על טמפרטורת גוף של 37 מעלות צלזיוס במשך הניתוח לאבטח את העכבר על stereotax. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרחוץ את הראש עם שלושה עלובי לסירוגין של אתנול בבטאדין לחטא את האזור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים ירידה של משחה עין Tobradex על כל עין כדי לשמור על עיניים לחות במהלך הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עושים חתך לאורך קו האמצע של הראש למשוך את העור לאחור כדי לחשוף את הגולגולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר בזהירות את fascia מהגולגולת באמצעות קנס שקצהו מלקחיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתר את האזור להיות מוזרק באמצעות קואורדינטות stereotaxic ולסמן את הגולגולת עם עט כירורגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מקדח דנטלי עם אזור 1.4mm בר, דקה של הגולגולת כ 2 מ&quot;מ בקוטר עד סדקים בגולגולת, חלוקת שטח דליל למקטעים שונים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך הליך זה, לשמור על הגולגולת לח עם יישומים של תמיסת מלח סטרילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע craniotomy בעדינות על ידי הסרת חלקי הגולגולת באמצעות דליל במיוחד קנס מלקחיים מוטה. </li></ol> 3. הזרקת הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם KimWipe להציב מעל המכסה, פתח את הצינור של וירוס פיפטה 1.5uL (להזרקה 1uL) של הנגיף על חתיכה קטנה של parafilm. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הניחו את קצה micropipette לתוך המניה ויראלי ידני למשוך את הבוכנה. אם הקושי הוא מנוסה ציור מניות נגיפי אל תוך micropipette, הטיפ יכול להיות מוגדל מעט להיות פירסינג KimWipe עם micropipette לשבור חלק קטן של זכוכית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זרוע micropump תחתון על הבוכנה עד כמות קטנה של וירוס הוא הפיג מקצה micropipette. הסר ירידה קטנה עם המוליך כותנה טיפ המוליך להשליך על wastמיכל דואר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למרוח טיפת שמן מינרלי אל קצה micropipette כדי למנוע סתימת כמו micropipette מונמך לתוך המוח. </li></ol> 4. הזרקת וירוס <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש ב X ו-Y stereotaxic קואורדינטות, עמדת micropipette על השטח להיות מוזרק. בניסוי זה, stereotaxic את הקואורדינטות משמש לאיתור קליפת המוח החזותית העיקריים הם האחורי 2.7mm ל 2.5mm גבחת ו לרוחב קו האמצע. לאט לאט להוריד את micropipette (בקצב משוער של 1mm/1minute) לתפקיד Z הנכון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזן את הפרמטרים הרצויים הזרקה לתוך תיבת Micro4 בקר micropump SYS וליזום את הזריקה. לצורך ניסוי זה, 1 microliter מעל 10 דקות ישמש בשיעור של זריקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר הוא סיים את הזריקה, לעזוב את פיפטה לנוח 1-2 דקות כדי למנוע בזרימת של הנגיף במהלך ההסרה. לאחר תקופה זו, לאט לאט להסיר את micropipette מהמוח (שיעור זהה לזה לעיל). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפר את הקרקפת ואת החותם אותו עם דבק רקמות. הזרק את החיה מתחת לעור עם עצירות במינון של 0.1 מ&quot;ג / ק&quot;ג כל 8-12 שעות במשך 72 השעות הבאות, או כל עוד בעל החיים הוא מציג סימנים של כאב. אפשר לשחזר את החיה מתחת לפנס חום עד שהוא ambulating ומוכן להחזיר את הכלוב שלה. ניסויי הדמיה יכול להיות יזם לאחר זמן דגירה הרצוי (ימים עד שבועות לאחר ההזרקה נגיפי). </li></ol> 5. ניקוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוטפים את micropipette עם אקונומיקה 10% וזורקים אותו במיכל החדים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השלך את מיכל הפסולת באותו אופן כמו בסעיף 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בטל ספסל נייר מעבדה לפח Biohazard ולנגב את כל המשטחים ומכשירים שייתכן לבוא במגע עם הנגיף עם אקונומיקה 10%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הווירוס יכול להיות בשימוש קפוא שוב, תוך התחשבות כי חזר להקפיא / להפשיר מחזורים לגרום השפלה של הנגיף. </li></ol> 6. נציג תוצאות <img src="/files/ftp_upload/2140/2140fig1.jpg" alt="איור 1" /> באיור 1. Transduced נוירון לאחר הזרקה של פעמיים תקועים adeno הקשורים וירוס סרוטיפ 1 (dsAAV S1) נושאת חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) תחת שליטה של promotor CMV. גוף התא, כמו גם הדנדריטים הפרוקסימלית ומ דיסטלי גלויים לעין בסעיפים קבוע צילמו באמצעות מיקרוסקופ epifluorescent. בר סולם = 100 מיקרומטר. <img src="/files/ftp_upload/2140/2140fig2.jpg" alt="איור 2" /> איור 2. תיוג אופייני זריקה וירוס תוך גולגולתי בקליפת הראייה העיקרית באמצעות S1 dsAAV מראה את מידת התפשטות הנגיף, כמו גם נוירונים שכותרתו, גליה ותהליכים. בר סולם = 250 מיקרומטר. <img src="/files/ftp_upload/2140/2140fig3.jpg" alt="איור 3" /> איור 3. תיוג של תאים בהיפוקמפוס באמצעות S1 dsAAV. בר סולם = 250 מיקרומטר. נתונים אלה מעובדים Lowery et al. 2009 1

<ol><li>Kaplitt, M. G., Leone, P., Samulski, R. J., Xiao, X., Pfaff, D. W., O'Malley, K. L., During, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+gene+expression+and+phenotypic+correction+using+adeno-associated+virus+vectors+in+the+mammalian+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Long-term gene expression and phenotypic correction using adeno-associated virus vectors in the mammalian brain.</a> Nat Genet. 8, 148-154 (1994).</li>
<li>Harding, T. C., Dickinson, P. J., Roberts, B. N., Yendluri, S., Gonzalez-Edick, M., Lecouteur, R. A., Jooss, K. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+gene+transfer+efficiency+in+the+murine+striatum+and+an+orthotopic+glioblastoma+tumor+model%2C+using+AAV-7-+and+AAV-8-pseudotyped+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Enhanced gene transfer efficiency in the murine striatum and an orthotopic glioblastoma tumor model, using AAV-7- and AAV-8-pseudotyped vectors.</a> Hum Gene Ther. 17, 807-820 (2006).</li>
<li>Lo, W. D., Qu, G., Sferra, T. J., Clark, R., Chen, R., Johnson, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adeno-associated+virus-mediated+gene+transfer+to+the+brain%3A+duration+and+modulation+of+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Adeno-associated virus-mediated gene transfer to the brain: duration and modulation of expression.</a> Hum Gene Ther. 10, 201-213 (1999).</li>
<li>Lowery, R. L., Zhang, Y., Kelly, E. A., Lamantia, C. E., Harvey, B. K., Majewska, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+long-term+labeling+of+cells+in+the+developing+and+adult+rodent+visual+cortex+using+double-stranded+adeno-associated+viral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Rapid long-term labeling of cells in the developing and adult rodent visual cortex using double-stranded adeno-associated viral vectors.</a> Dev Neurobiol. 69, 674-688 (2009).</li>
</ol>

פרוטוקולים בעלי חיים ניסיוניים אושרו על ידי האוניברסיטה של ​​אוניברסיטת רוצ&#39;סטר ועדת משאבים בעלי חיים (UCAR) בהתאם למדיניות PHS על טיפול השתמש ההומאנית של חיות מעבדה.

Virally בתיווך משלוח גן בעל פוטנציאל גדול למחקר של תהליכים נוירולוגיות וטיפול בהפרעות במוח 1,2,3. צדדיות הגדול של טכניקה זו יכולה גם להיות מנוצלת כדי fluorescently תווית תאים הדמיה הן במבחנה in vivo 4. כאן אנו מדגימים נוהל מפורט עבור התמרה של נוירונים גליה בעכבר קליפת המוח החזותית באמצעות פעמיים תקועים adeno אסוציאציה וירוס להביע משופרת חלבון פלואורסצנטי ירוק. בעוד טכניקה זו היא יחס...

<table><tbody><tr><td>מתאם להטיה לעכברים וחולדות רכסאניות &amp;#8211;</td><td>Stoelting Co.</td><td>51625</td><td>ניתן להחליף במכשיר סטריאוטקסי רגיל לקיבוע בעלי חיים לניתוח</td></tr><tr><td>מספרי Bonn דקים מאוד, 8.5cm, קצה ישר, קו חיתוך 13mm</td><td>Fine Science Tools</td><td>14084-08</td><td></td></tr><tr><td>פינצטות לחבישות עיניים, 10cm, רוחב קצה 0.5mm, מעוקל</td><td>Fine Science Tools</td><td>11152-10</td><td></td></tr><tr><td>פינצטות Dumont #5/45- קצה Dumoxel סטנדרטי, 11cm, זוויתי</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td><td>פינצטות בעלות קצה דק במיוחד לביצוע קרניאוטומיה</td></tr><tr><td>פינצטות בעלות תבנית סטנדרטית, ישרות, קצה 2.5mmx1.35mm, 12cm</td><td>Fine Science Tools</td><td>11000-12</td><td></td></tr><tr><td>תיבת בקרת מיקרו-מומנט ומסוף ידני Tech2000</td><td>Ram Products, Inc.</td><td>TECH2000ON/OFF</td><td>מקדחה דנטלית</td></tr><tr><td>מקדחי מיקרו מפלדת אל-חלד, קוטר קצה 1.4mm</td><td>Fine Science Tools</td><td>19008-14</td><td></td></tr><tr><td>מיקרופיפטות Wiretrol, למתן 1-5 µL</td><td>VWR international</td><td>5-000-1001 or 53480-287</td><td></td></tr><tr><td>שמן מינרלי</td><td>VWR international</td><td>29447-338</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו-מניפולטור ידני ובסיס הטיה (לימניים)</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>M3301-M3-R</td><td>משמש לקביעת קואורדינטות סטריאוטקסיות</td></tr><tr><td>משאבת UltraMicroPump (UMP3) (אחת) עם בקר SYS-Micro4</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>UMP3-1</td><td></td></tr><tr><td>חוטי תפירה</td><td>VWR international</td><td>95056-952</td><td></td></tr><tr><td>מכשיר למשיכת מיקרופיפטות P-97 Flaming/Brown</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td>P-97</td><td></td></tr><tr><td>Tobradex</td><td></td><td></td><td>זמין משירותי הווטרינריה של המוסד &amp;rsquo; שלכם</td></tr></tbody></table>

הזרקה תוך גולגולתי של adeno הקשורים וקטורים ויראליים

Intracranial Injection of Adeno-associated Viral Vectors

הזרקה תוך גולגולתי של וקטורים ויראליים שהונדסו חלבון פלואורסצנטי היא טכניקה תיוג תכליתי עבור להדמיה של תת מסוימים של תאים באזורים שונים במוח הן in vivo ו בסעיפים המוח. בניגוד הזרקה של צבעי ניאון, תיוג ויראלי מציעה המיקוד של סוגי תאים בודדים הוא זול יותר זמן רב יותר מאשר הקמת קווי עכבר מהונדס. בטכניקה זו, adeno הקשורים וקטור ויראלי (AAV) מוזרק intracranially באמצעות קואורדינטות stereotaxic, micropipette ואת משאבת אוטומטיות למסירה מדויקת של AAV לאזור הרצוי עם נזק מינימלי לרקמות שמסביב. פרמטרים של הזרקה ניתן להתאים את הניסויים הפרט על ידי התאמת גיל החיה בקצב הזרקה, מיקום הזריקה, עוצמת הזריקה, של הזרקה, AAV סרוטיפ ואת האמרגן נהיגה ביטוי גנים. בהתאם לתנאי הנבחר, virally-Induced ביטוי transgene יכול לאפשר ויזואליזציה של קבוצות של תאים, תאים בודדים או תהליכים תאיים בסדר, עד לרמה של הקוצים הדנדריטים. הניסוי שמוצג כאן מציג זריקה של AAV פעמיים תקועים לבטא חלבון פלואורסצנטי ירוק עבור תיוג של גליה נוירונים בקליפת המוח החזותית העיקרי בעכבר.

כאן אנו מציגים את הזריקה תוך גולגולתי של וקטורים AAV תיוג הניאון של גליה נוירונים בקליפת המוח הראייתית.

הזרקה תוך גולגולתי של Adeno הקשורים וקטורים ויראליים

הזרקה תוך-גולגולית של וקטורים ויראליים שהונדסו להביע חלבון פלואורסצנטי היא טכניקת סימון רב-גונית להדמיה של...

ניתן להשתמש בווקטורים ויראליים כדי לבטא חלבונים פלואורסצנטיים בתתי-אוכלוסיות ספציפיות של תאים ברקמה. במקרה זה, וירוס המבטא חלבונים מהונדסים מוחדר לקליפה הראייתית הראשונית של המוח, לאחר ביצוע קרניאוטומי קטן מעל אזור זה. לאחר מכן, מיקרו-פיפטת זכוכית מורדת אל תוך המוח, ווקטור ויראלי המקושר לשיניים מוזרק לתוך המוח, ואת אתר הניתוח סוגרים.לאחר שהחיה התאוששה, ניתן לבצע הדמיה כדי לעקוב אחר גורלן של תאים המסומנים פלואורסצנטית in vivo או בחתכי מוח. היתרונות העיקריים של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, כגון סימון בצבע פלואורסצנטי וקווי עכברים טרנסגניים, הם היכולת להתמקד בסוגי תאים בודדים והעובדה שהיא פחות יקרה ופחות גוזלת זמן מאשר הקמה של קו טרנסגני. השימוש בווקטורים ויראליים של adeno-associated מאושר לרמת בטיחות ביולוגית אחת או BSL one.בשלב זה, יש ללבוש חלוק מעבדה וכפפות בהתאם לנהלי העבודה עם חומרים ברמת בטיחות ביולוגית BSL 1. התחילו בהכנת קבינט בטיחות ביולוגית Class two עבור נגיף Ali quoting. פעולה זו תשמור על פעילותו של הנגיף על ידי מניעת מחזורי הקפאה והפשרה חוזרים. פנו מהקבינט חפצים מיותרים ועקרו את המשטח באמצעות 70% ethanol.הניחו כלי כימי (beaker) המכיל תמיסת הכלתרה (bleach) בריכוז 10% בתוך קבינת הבטיחות הביולוגית, לצורך איסוף פסחתים מזוהמים בנגיפי שיניים. כמו כן, הניחו מבחנות סטריליות בנפ

intracranial-injection-of-adeno-associated-viral-vectors

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

מקור: Pereira, M. et al., In vivo Direct Reprogramming של תאי גליה תושבים לאינטרנוירונים על ידי הזרקה תוך מוחית של וקטורים ויראליים. J. Vis. Exp. (2019)סרטון זה מדגים הזרקה סטריאוטקסית של נגיף הקשור לאדנו לקליפת המוח של עכבר טרנסגני כדי להעביר תכנות מחדש של עצבים תלויי Cre וגנים מדווחים פלואורסצנטיים לתאי גליה.

הזרקה סטריאוטקסית של וקטורים ויראליים לתכנות מחדש של תאי גליה במודל עכבר

מקור: Li, D., et al. הזרקה תוך-תקלית ישירה של נגיפים רקומביננטיים הקשורים לאדנו בעכברים בוגרים. J. Vis. Exp. (2019)סרטון זה מדגים את הליך ההזרקה התוך-תקלית של נגיפים הקשורים לאדנו (AAV) לנוזל המוח (CSF) של עכבר ער, המכסה הכנת מזרק, יישור עמוד השדרה והחדרת מחט מדויקת. שיטה זו מאמתת העברת גנים ממוקדת, ותומכת בפוטנציאל שלה לטיפולים במערכת העצבים המרכזית.

העברה תוך-תקלית של וירוסים במודל עכבר לטיפול במחלות מערכת העצבים המרכזית

מקור: Grames, M. S., et al. שיטות וטיפים למתן תוך ורידי של נגיף הקשור לאדנו לחולדות והערכת התמרה של מערכת העצבים המרכזית. J. Vis. Exp. (2017)סרטון זה מדגים את הזרקת וריד הזנב של נגיף אדנו-קשור רקומביננטי (AAV) בחולדות. לאחר ההזרקה לווריד הזנב הרוחבי, הנגיף נכנס לזרם הדם, מסתובב דרך הלב ומגיע למוח, שם הוא נכנס לתאי עצב ומקל על ייצור חלבון מטרה ליישומים נוירותרפיים.

 מתן תוך ורידי של וקטורים רקומביננטיים של וירוסים הקשורים לאדנו במודל חולדה 

כאן אנו מדגימים טכניקה להתמרה עצבית נרחבת על ידי הזרקה תוך-חדרית של נגיף הקשור לאדנו למוח העכבר היילוד.  שיטה זו מספקת דרך מהירה וקלה להשיג ביטוי לכל החיים של טרנסגנים המועברים באופן ויראלי.

הזרקת נגיפי Intracerebroventricular של ילודים עכבר המוח לתמרה עצבית מתמשכת ונרחבת

המוח הוא אתר ייחודי עם איכויות שאינם מיוצגות היטב על ידי במבחנה או ניתוחים מחוץ לרחם. מודלים עכבר orthotopic עם מאפייני מיקום וצמיחה לשחזור ניתן ליצור באופן אמין עם זריקות תוך גולגולתי באמצעות מכשיר קיבוע stereotaxic ומשאבת מזרק בלחץ נמוך.

יצירה אנטומית מדויק והשחזור תוך גולגולת xenografts של גידולים במוח אדם

שיטות משלוח הגן רחב היקף מערכת העצבים המרכזית בחולדה מכוסים. בדוגמה זו, המטרה היא לחקות מחלה המשפיעה על חוט השדרה כולו. התמרה חושית רחבה יכול לשמש כדי לספק חלבון טיפולית מערכת העצבים מהמינהל, היקפי חד פעמי.

שיטות וטיפים על עירוי לוריד של Adeno-הקשורים וירוס חולדות והערכה של מערכת העצבים המרכזית התמרה חושית

כאן אנו מציגים טכניקה הזרקה ישירה במחלה באמצעות הידרוכלוריד לידוקאין 1% פתרון ויראלי להבטיח משלוח וירוס יעיל adeno-הקשורים לבעלי חיים קטנים ולהקים מערכת הניקוד לחזות התמרה חושית יעילות המרכזי מערכת העצבים על פי מידת חולשה חולפת הנגרמת על ידי לידוקאין.

במחלה ישירה הזרקה של וירוסים Adeno-הקשורים רקומביננטי בעכברים מבוגרים

בכתב יד זה, הזרקה תת-קרקעית מודגמת כשיטת העברה וקטורית תקפה לרקמות עיניים בעכברים באמצעות מערכת הזרקה המורכבת ממשאבת מזרק אינפוזיה/נסיגה ומזרק נשלף גז בשילוב עם מחטי מיקרו-הזרקה. מערכת הזרקה זו ניתנת להתאמה גם לנתיבי ניהול תוך עיניים אחרים.

מתן תת-לחמית של וקטורים של וירוסים הקשורים לאדנו במודלים של בעלי חיים קטנים

מתואר הליך כירורגי לביצוע זריקות לתוך בור המים המותני של החולדה הצעירה. גישה זו שימשה להעברה תוך-תאית של וקטורים של ריפוי גנטי, אך צפוי כי גישה זו תוכל לשמש למגוון טיפולים, כולל תאים ותרופות.

משלוח וקטורי תוך-תאי בחולדות צעירות באמצעות הזרקת בור מים מותני

כאן אנו מפרטים פרוטוקול אופטימלי להזרקת וריד זנב רוחבי של עכבר לניהול מערכתי של וירוס הקשור לאדנו (AAV) בעכברים בוגרים. בנוסף, אנו מתארים פרוטוקולים של בדיקות נפוצות להערכת התמרה AAV.

אספקה עקבית של וירוס הקשור לאדנו באמצעות הזרקת וריד זנב לרוחב בעכברים בוגרים

מתוארת טכניקה חדשה להעברה נרחבת של נגיף הקשור לאדנו, המשתמשת בעירוי וירוס תת-עכבישי. שיטה זו לא רק מבטיחה התמרה נרחבת של נוירונים ניאו-קורטיקליים של עכברים בשכבות שטחיות, אלא גם מביאה לביטוי סלקטיבי של הטרנסגן בנוירונים פירמידליים בשכבה חמש, גם כאשר משתמשים במקדם לא סלקטיבי.

התמרה נרחבת של נוירונים ניאוקורטיקליים של עכברים על ידי הזרקה תת-עכבישית של AAV2

למד הזרקה תוך גולגולתית של וקטורים ויראליים מסוג AAV לסימון פלואורסצנטי של נוירונים ותאי גליה בקורטקס הראייה. שיטה זו מאפשרת מעקב אחר תאים מתויגים בחי ומציעה חלופה חסכונית לקווי עכברים טרנסגניים.

הזרקה תוך גולגולתי של Adeno הקשורים וקטורים ויראליים

גלה סרטונים נוספים