Name: אינדוקציה של Hypophysitis אוטואימוניות הניסויי עכברים SJL (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-17T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 38 s
Description: למד אינדוקציה של היפופיזיטיס אוטואימונית בעכברי SJL באמצעות הזרקת אימונוגן יותרתי. הפרוטוקול כולל הערכת חומרת המחלה באמצעות היסטופתולוגיה וניתוח חדירת לויקוציטים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי NIH מענק DK080351 למחשב, ועל ידי מתנה נדיבה של טרי משפחה קריסטין גור.

ניסיוני פרוטוקול לאחר immunogen יותרת המוח מוכן (ראה מאמר נלווה), הוא מוזרק תת עורי לעכברים SJL (מעבדות ג&#39;קסון, 000,686 מניות). הזרקת זהה השני הוא חזר 7 ימים לאחר מכן. עכברים משמשים כדי לאסוף in vivo ו שלאחר המוות התוצאות. שלב 1. תת עורי הזרקת immunogen יותרת המוח לעכברים SJL עכברים מורדמים לראשונה על ידי הזרקת 0.5 מ&quot;ל של 20 Tribromoethanol-2,2,2 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​(Avertin, TCI אמריקה, T-1420) intraperitoneally. עכברים מוזרקים תת עורית אז עם 100 μl של אמולסיה יותרת המוח כי, כפי שצוין המלווה יופיטר 2181 מאמר זה, מכיל 1 מ&quot;ג של תמצית בלוטת יותרת המוח ו 0.25 מ&quot;ג של פרוינד משלים של שלמה. התחליב מוזרק באזור הגב רגל שמאל האחורית ((50 μL) ובאזור המפשעה ימין (50 μL). אמולסיה יותרת המוח מוזרק שוב אל מול אתרי (50 μl באזור הגב רגל ימין האחוריות וביום 7 50 μl באזור מפשעתי משמאל). עכברים מנוטרים יומי במשך 3 הימים הראשונים בשבוע אז עד יום של הקרבה, שהוא בדרך כלל 28 ימים לאחר החיסון הראשון. שלב 2. איסוף בתוצאות vivo: מבחני דם הרקמה הנפוצה ביותר להעריך את תוצאות הניסוי תוך העכברים עדיין בחיים הוא דם. הדם הוא נמשך באופן שגרתי 14 ימים לאחר החיסון הראשון כדי למדוד את רמות נוגדנים יותרת המוח או סמנים אחרים כמו ציטוקינים chemokines. הדם נאסף עכברים חיים כדלקמן. עכברים מוחזקים היטב בעורפו של הצוואר והחלק האחורי של עצם הלסת ממוקמת. לאחר האחורי של עצם הלסת ממוקמת, 4 אזמלי מ&quot;מ המשמשים לנקב את צרור וסקולרית submandibular. אחרי הדם נאסף, לחץ על מקום באזור באמצעות ספוגית אלכוהול כדי למנוע שטף דם. הדם שנאסף centrifuged ב 2000 גרם במשך 20 דקות, ומאוחסנים ב -80 ° C עד בשימוש. שלב 3. איסוף שלאחר המוות התוצאות: יותרת המוח histopathology עכברים הם הקריבו בדרך כלל 28 ימים לאחר החיסון הראשון. התכונה הקרדינל צורך לקבוע את האבחנה של EAH היא חדירה של בלוטת יותרת המוח על ידי תאים mononuclear hematopoietic. עכברים מומתים על ידי הצבת אותם בתא פלסטיק אטום כי הוא perfused עם CO 2. עכברים מוחזקים בחדר עבור סכום כולל של 8 דקות. לאחר המתת חסד, בלוטת יותרת המוח נאסף כמתואר במאמר נלווה. בלוטת יותרת המוח הפגוע נראה נפוח יותר חסיד היטב מאטר הדורה שמסביב. מלקחיים שארפ משמשים כדי לשחרר את קרומי המוח המקיף את המוח. לאחר מהלכים יותרת המוח בחופשיות על העצם יתדי, קצה אחד של בלוטת יותרת המוח נתפסת עם מלקחיים את בלוטת יותרת המוח הוא הרים בזהירות. הבלוטה ממוקמת אז צינור microcentrifuge המכיל 5 מקבע של Beckstead. בלוטת יותרת המוח היא קבועה לילה, עטוף בנייר העדשה, והושמו קלטת. בלוטות מעובדים מכן באמצעות פרוטוקול הבאים: <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> תחנה מספר </td><td> מגיב </td><td> הזמן בדקות </td><td> טמפרטורה (צלזיוס) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 70% אלכוהול </td><td> 5 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 70% אלכוהול </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 95% אלכוהול </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 95% אלכוהול </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 5 </td><td> 100% אלכוהול </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 6 </td><td> 100% אלכוהול </td><td> 7.5 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 7 </td><td> 100% אלכוהול </td><td> 7.5 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 8 </td><td> קסילן </td><td> 20 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 9 </td><td> קסילן </td><td> 20 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 10 </td><td> קסילן </td><tד&gt; 20 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 11 </td><td> פרפין </td><td> 30 </td><td> 58 </td></tr><tr><td> 12 </td><td> פרפין </td><td> 5 </td><td> 58 </td></tr><tr><td> 13 </td><td> פרפין </td><td> 5 </td><td> 58 </td></tr></tbody></table> לאחר עיבוד, בלוטות יותרת המוח המוטבעים פרפין לפחות 5 סעיפים nonconsecutive (5-מיקרומטר עבה) נחתכים מבלוטת כל אחד. לאחר חתך, בלוטות הם מוכתמים hematoxylin ו eosin, וניתח לכמת את חדירת mononuclear. קטע עם חדירה החמור ביותר נבחרה מניה. חומרת הוא הבקיע מבוסס על אומדן סובייקטיבית של מידת החלפת הרס בלוטת יותרת המוח הקדמית או על ידי תאים חיסוניים: ציון 0, לא מחלה, כיתה 1, 2% -20% מעורבות, כיתה 2, 20% -30%; בדרגה 3, 30% -50%; כיתה 4, 50% -90%; ציון 5, יותר מ 90%. סעיפים כל הבקיע על ידי שני אנשים מסונוורים למקור הסעיפים.

<ol><li>Tzou, S. C., Lupi, I., Landek, M., Gutenberg, A., Tzou, Y. M., Kimura, H., Pinna, G., Rose, N. R., Caturegli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+Hypophysitis+of+SJL+mice%3A+Clinical+Insights+from+a+New+Animal+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Autoimmune Hypophysitis of SJL mice: Clinical Insights from a New Animal Model.</a> Endocrinology. , (2008).</li>
<li>Twarog, F. J., Rose, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+production+of+thyroid+autoantibodies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">The production of thyroid autoantibodies in mice.</a> J Immunol. 101, 242-2450 (1968).</li>
<li>Patrick, J., Lindstrom, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+response+to+acetylcholine+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Autoimmune response to acetylcholine receptor.</a> Science. 180, 871-872 (1973).</li>
<li>Caturegli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+hypophysitis%3A+an+underestimated+disease+in+search+of+its+autoantigen%28s%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Autoimmune hypophysitis: an underestimated disease in search of its autoantigen(s).</a> J Clin Endocrinol Metab. 92, 2038-2040 (2007).</li>
<li>Beckstead, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+technique+for+preservation+of+fixation-sensitive+antigens+in+paraffin-embedded+tissues%3A+addendum%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">A simple technique for preservation of fixation-sensitive antigens in paraffin-embedded tissues: addendum.</a> J Histochem Cytochem. 43, 345-345 (1995).</li>
<li>Levine, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergic+adenophypophysitis%3A+new+experimental+disease+of+the+pituitary+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Allergic adenophypophysitis: new experimental disease of the pituitary gland.</a> Science. 158, 1190-1191 (1967).</li>
<li>Yoon, J. W., Choi, D. S., Liang, H. C., Baek, H. S., Ko, I. Y., Jun, H. S., Gillam, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+an+organ-specific+autoimmune+disease%2C+lymphocytic+hypophysitis%2C+in+hamsters+by+recombinant+rubella+virus+glycoprotein+and+prevention+of+disease+by+neonatal+thymectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Induction of an organ-specific autoimmune disease, lymphocytic hypophysitis, in hamsters by recombinant rubella virus glycoprotein and prevention of disease by neonatal thymectomy.</a> Journal of Virology. 66, 1210-1214 (1992).</li>
<li>Davis, J. R., McMahon, R. F., Lowenstein, P. R., Castro, M. G., Lincoln, G. A., McNeilly, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenovirus-mediated+gene+transfer+in+the+ovine+pituitary+gland+is+associated+with+hypophysitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Adenovirus-mediated gene transfer in the ovine pituitary gland is associated with hypophysitis.</a> J Endocrinol. 173, 265-271 (2002).</li>
<li>Rotondo, F., Quintanar-Stephano, A., Asa, S. L., Lombardero, M., Berczi, I., Scheithauer, B. W., Horvath, E., Kovacs, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenohypophysitis+in+rat+pituitary+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Exp+Pathol%22%5BJournal%5D)">Adenohypophysitis in rat pituitary allografts.</a> Int J Exp Pathol. , (2010).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

ארבע טכניקות דווחו לגרום hypophysitis בחיות מעבדה. השיטה המתוארת במאמר זה, כי הוא הזרקה של חלבונים יותרת המוח מעורב עם משלים של פרוינד, הוא אחד העתיקים, שראשיתה 1967 6, שופרה לאחרונה 1. טכניקות אחרות הן הזרקה של גליקופרוטאינים וירוס מסיסים אדמת בשנת 1992 7, הזרקת stereotactic של adenovirus ישירות לתוך בלוטת יותרת המוח בשנת 2002 8, ואת השתלת בלוטות יותרת המוח מהלחץ עכברוש אחד תחת הקפסולה כליות של זן אחר חולדה בשנת 2010 9 . היתר...

<table><tbody><tr><td>עכברי SJL (The Jackson Laboratories)</td><td></td><td>מלאי 000686</td><td></td></tr><tr><td>2,2,2-Tribrom&amp;#8211;thanol (אברטין)</td><td>TCI America</td><td>T-1420</td><td></td></tr><tr><td>מקבע Beckstead&amp;rsquo;s</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

אינדוקציה של hypophysitis אוטואימוניות הניסויי עכברים sjl

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

Hypophysitis אוטואימוניות ניתן לשחזר בניסוי ידי הזרקה של חלבונים יותרת המוח מעורב עם adjuvant לעכברים רגישים 1. מודלים עכבר מאפשרים לנו ללמוד כיצד להתפתח מחלות, לעתים קרובות מתן העתק טוב של אותם תהליכים המתרחשים בבני אדם. עבור כמה מחלות אוטואימוניות, כמו סוכרת מסוג 1A, יש מודלים (העכבר NOD) כי באופן ספונטני לפתח מחלה דומה מקבילו האנושי. עבור רבים מחלות אוטואימוניות אחרות, לעומת זאת, המודל צריך להיות המושרה בניסוי. הגישה הנפוצה בהקשר זה היא להזריק את העכבר עם אנטיגן דומיננטי נגזר איבר הנלמד. לדוגמה, החוקרים מעוניינים השימוטו אוטואימוניות להזריק עכברים עם thyroglobulin 2, למעוניינים מיאסטניה גרביס להזריק אותם עם קולטן האצטילכולין 3. אם autoantigen למחלה אוטואימונית מסוימת אינה ידועה, החוקרים להזריק תמצית חלבון גולמי של איבר המטרה מהתגובה אוטואימוניות. עבור hypophysitis אוטואימוניות, autoantigen פתוגניים (ים) להישאר להיות מזוהה 4, ובכך הכנה גולמי חלבון יותרת המוח משמש. במאמר זה אנו וידאו להדגים כיצד לגרום hypophysitis אוטואימוניות הניסוי בעכברים SJL.

וידאו זה מראה כיצד לגרום hypophysitis אוטואימוניות בעכברים SJL וכיצד להעריך חומרתה ידי histopathology.

אינדוקציה של Hypophysitis אוטואימוניות הניסויי עכברים SJL

ניתן לשחזר ניסוייתת היפופיזיטיס אוטואימונית על ידי הזרקה של חלבוני היפופיזה מעורבבים עם אדג'ובנט (חומר עזר) לעכברים רגישים1. עכבר...

היפופיזיטיס אוטואימונית מאופיינת בהגדלה של בלוטת התת-היתר ובחסר של אחד או יותר מהורמוני בלוטת התת-היתר. הגורמים לאנטיגנים העצמיים נותרו לא ידועים. סרטון נלווה מדגים פרוטוקול להכנת אימונוגן מבלוטת התת-היתר של עכבר, אשר ישמש כאן ליצירת מודל עכבר המדמה היפופיזיטיס לימפוציטית אוטואימונית אנושית.האימונוגן של בלוטת היפופיזה מוזרק לזן עכברים רגיש. לאחר מכן, ההזרקה חוזרת על עצמה שבעה ימים מאוחר יותר; לאחר 14 ימים, נאסף דם למחקרי סמנים ביולוגיים. ביום ה-28, נאספות בלוטות היפופיזה מעכברים שהוקרבו, אשר נחתכות ונצבעות כדי לקבוע את מידת חדירת הלויקוציטים.היפופיזיטיס אוטואימונית היא מחלה המוכרת יותר ויותר, שעלולה להיות קשה להבחנה ממסות אחרות שאינן מפרישות הורמונים המופיעות בבסיס הגולגולת. למרות שהמחלה תוארה לראשונה לפני כ-50 שנה, האוטו-אנטיגנים המזוהים על ידי מערכת החיסון של החולה בהיפופיזיטיס אוטואימונית נותרו לא ידועים. בשנת 2008, פרסמנו את הפיתוח של מודל עכברים המשחזר באופן הדוק את המחלה האנושית שנועד לדמות.ניתן להשתמש במודל עכבר זה כדי לגלות את האוטו-אנטיגנים של היפופיזה המעורבים וללמוד יותר על הפתוגנזה וההיסטוריה הטבעית של היפופיזיטיס. המודל מבוסס על הזרקת חלבוני היפופיזה של עכבר למאבקי עכברים רגישים, כגון מאבקי SJL. יש לערבב חלבונים אלו עם אדג'ובנט חזק על מנת ליצור סביבה דלקתית מקומית שתגר

induction-of-experimental-autoimmune-hypophysitis-in-sjl-mice

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

סוג של רגישות יתר מאוחרת (DTH) היא תגובה דלקתית בתיווך CCR7-מפעיל זיכרון T (TEM) לימפוציטים. כאן אנו מדגימים כיצד להפעיל את אנטיגן ספציפי לערמונית תאים TEM, לגרום DTH המאמצת בחולדות לואיס לפקח על התגובה הדלקתית.

אינדוקציה וניטור של רגישות יתר מושהית-Type המאמצת בחולדות

Hypophysitis אוטואימוניות ניתן לשחזר בעכברים באמצעות הזרקת תמצית של חלבונים עכבר יותרת המוח.

הכנת Immunogen עכבר יותרת המוח עבור אינדוקציה של Hypophysitis אוטואימונית ניסויית

הסרטון מדגים השראת אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית במודל עכברי על ידי הזרקת שילוב של גליקופרוטאינים אוליגודנדרוציטים מיאלין ושחפת מיקובקטריום בלתי פעילה. המודל מאפשר לחוקרים לחקור מנגנוני מחלה ולבחון התערבויות טיפוליות.

אינדוקציה של אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית במודל עכבר

בסרטון זה, מודל עכבר של טרשת נפוצה נקבע באמצעות אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית (EAE). העכבר מוזרק עם תחליב המכיל פפטיד עצבי ואדג'ובנט, המפעיל תגובה חיסונית המפעילה תאי T אוטוריאקטיביים. לאחר מכן מתבצעת הזרקה של רעלן שעלת (PTX) כדי להגביר את חדירות מחסום הדם-מוח, מה שמאפשר לתאי T האוטו-תגובתיים לחדור למוח. חדירה זו יוזמת מפל איתות שבסופו של דבר גורם לנזק למיאלין, המחקה את המצב הדה-מיאלינציה של טרשת נפוצה.

העברת לימפוציטים bm12 למושתל C57BL/6 היא מודל מבוסס של זאבת אדמנתית מערכתית. כאן אנו מתארים כיצד ליזום מחלה באמצעות מודל זה וכיצד לאפיין תאי עזר זקיקי T, תאי B במרכז הנבט ותאי פלזמה על ידי ציטומטריית זרימה.

דגם bm12 העין מתנהל של זאבת אדמנתית המערכתית (לופוס) בC57BL עכברים / 6

כתב יד זה מתאר את השיטות לאינדוקציה וניקוד של מודל דלקת המוח האוטואימונית הניסויי (EAE), יחד עם הערכת התפלגות תאי החיסון ורמות ציטוקינים mRNA בבלוטות הלימפה, הטחול, הדם וחוט השדרה באמצעות ציטומטריית זרימה ו-PCR כמותי, בהתאמה, בשלבי מחלה שונים.

אינדוקציה של ניסיוני אוטואימוניות Encephalomyelitis עכברים וההערכה של הפצת מחלות התלויה של תאים חיסוניים ברקמות שונות

דו ח זה מתווה גישה פשוטה לזירוז בהצלחה ניסוי חיסון לדלקת בעצה (EAN) באמצעות חלבון המיאלין אפס פפטיד180-199 (P0) בשילוב עם אדג'וונט מלאה של פרוינד, הרעלן שעלת. אנו מציגים פרדיגמה מתוחכם המסוגל להעריך במדויק את היקף הגירעונות פונקציונלי, neuropathology המתרחשים EAN הזה.

גישה פשוטה כדי לגרום לדלקת בעצה חיסון ניסיוני בעכברים C57BL/6 עבור הערכות Neuropathological פונקציונלי

אנו מתארים מודל הפטיטיס חיסון in vivo בעכברי BALB/c שניתן להשתמש בו כדי לחקור את הפתוגנזה של הפטיטיס אוטואימונית הנגרמת על ידי תרופות, כולל הבדלי מין שנראו במחלה זו. נתאר כיצד מודל זה מדגים ניתוחים הניתנים לשחזור באמצעות טכניקות ניסיוניות in vivo ו- in vitro.

אינדוקציה של הפטיטיס אוטואימונית הנגרמת על ידי תרופות בעכברי BALB/c לחקר המנגנונים הפתוגניים שלה

נקבעו מספר סוגים של מודלים של בלוטת התריס של השימוטו, כמו גם דלקת אוטואימונית ספונטנית של בלוטת התריס בעכבר NOD. עכברי H-2h4 הם מודל פשוט ואמין להשראת HT. מאמר זה מתאר גישה זו ומעריך את התהליך הפתולוגי להבנה טובה יותר של מודל SAT murine.

יצירת עכבר מודל אוטואימוני ספונטני של בלוטת התריס

אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית היא אחד המודלים הנפוצים ביותר של טרשת נפוצה. בפרוטוקול הנוכחי, עכברי C57BL/6J משני המינים מחוסנים בפפטיד גליקופרוטאין אוליגודנדרוציטים מיאלין, וכתוצאה מכך בעיקר פרזיס עולה של הזנב והגפיים. כאן אנו דנים בפרוטוקול של אינדוקציה והערכה של EAE.

מידול טרשת נפוצה בשני המינים: MOG35-induced ניסיוני אוטואימוני אנצפלומיאליטיס

כאן, אנו מדווחים על פרוטוקול המבסס מודל עכבר של דלקת מפרקים שגרונית (RA) באמצעות העברה מאמצת של תאי CD4+ T מעכברי SKG, המספק כלי ניסיוני מהיר ואמין לחקירת המנגנונים החיסוניים, התקדמות פתולוגית ופיתוח טיפולים חדשים לדלקת מפרקים שגרונית.

מודל העברה מאמץ של דלקת מפרקים שגרונית בעכברים

למד אינדוקציה של היפופיזיטיס אוטואימונית בעכברי SJL באמצעות הזרקת אימונוגן יותרתי. הפרוטוקול כולל הערכת חומרת המחלה באמצעות היסטופתולוגיה וניתוח חדירת לויקוציטים.

אינדוקציה של Hypophysitis אוטואימוניות הניסויי עכברים SJL

גלה סרטונים נוספים