אינדוקציה ניקוד קליני כרוני, relapsing Encephalomyelitis אוטואימונית ניסויית

אני כריסטין ביטון. אני דוקטורנטית במעבדה של ג'ורג' צ'ן במחלקה לפיזיולוגיה וביופיזיקה של אוניברסיטת קליפורניה באירוואיין. במהלך הימים הקרובים אראה לכם כיצד להשרות ולנטר EAE כרוני עם התפרקויות, המהווה קיצור של Experimental Autoimmune Encephalomyelitis, בחולדות DA.

זהו מודל חייתי לטרשת נפוצה, או ליתר דיוק, אחד מהמודלים החייתיים לטרשת נפוצה. הוא מאופיין בשיתוק רפוי עולה בבעלי החיים הללו ובמאפיינים היסטולוגיים הדומים למחלה בבני אדם. לכן, התהליך יימשך מספר ימים.

ביום הראשון אראה לכם כיצד להכין את האמולסיה הגנית עם הומוגנאט של ไขสันหลัง (spinal cord) נאיבי של עכברים ב-complete Freund's adjuvant. ביום השני, אראה לכם כיצד לחסן את החולדות ל-EAE, ולאחר מכן נחכה בין שבעה ל-15 ימים כדי לראות את הסימנים הקליניים הראשונים בבעלי החיים הללו, ואז אראה לכם את שלבי ההתקדמות השונים של ה-EAE בבעלי חיים שונים. לכן, ראשית אראה לכם את כל הריאגנטים והחומרים הדרושים להכנת האמולסיה.

אשתמש ב-adjuvant H 37 ra מלא, אך למרות שהוא כבר מכיל Mycobacterium tuberculosis, אגביר את הריכוז שלו ל-4 mg/mL על ידי הוספה של Mycobacterium tuberculosis H 37 ra מיובש נוסף. כדי להכין את החיידקים המיובשים, עלי להניח אותם במכתש וריסוק ולהפוך אותם לאבקה דקה בעזרת העיפש. לאחר מכן, אוסיף את החיידקים הללו ל-adjuvant.

כעת העזר (adjuvant) מוכן. השלב הבא הוא להכין את האנטיגן שלי. לכן, אוציא חוט שדרים של חולדות (D rat spinal cords) שהוקפאו במינוס 80 מעלות, וכדי לשמור עליהם קפואים מאוד, אני אניח אותם על כלי שקילה בתוך קרח יבש, ואוציא אותם אחד אחד. באמצעות להבי תער פשוטים, אני אקצוץ את חוט השדרים לתוך כלי השקילה.

כעת אני אעמיד את העזר הכימי (adjuvant) המועשר על הוורטקס. תוך כדי הוורטקס, אוסיף את רקמת חוט השדרה למעט למעט אל העזר הכימי. לאחר שערבבנו את כל רקמת חוט השדרה עם העזר הכימי על הוורטקס, נמשיך להפעיל את הוורטקס למשך חמש דקות נוספות, ולאחר מכן נעביר את התמיסה שהוכנה למזרקים מזכוכית בנפח 5 M.

נחבר שתי מזרקות זכוכית של 5 מ"ל באמצעות גשר 16 G, ונדחף את האמולסיה ממזרקה אחת לשנייה במהירות המרבית עבור אותו גשר. לאחר מספר דקות, כאשר האמולסיה תתחיל להתרחות, נעבור לגשר קטן יותר. זהו גשר 18 G, והוא יהפוך את האמולסיה לסמיכה עוד יותר; נשמור אותה במזרקות הללו עם גשר זה, עטופה בנייר אלומיניום, למשך הלילה במקרר.

שקלתי 30 milligrams של microbe tuberculosis על נייר שקילה. העברתי אותם למכתש. ובעזרת פסטקה, רסקתי את צברי החיידקים לאבקה דקה.

אך אין ללחוץ חזק מדי עם העלי, כדי לא לשבור את החיידקים. כאשר החיידקים מצטברים בתחילת הפרוצדורה, הם בעלי גוון צהוב-בז'. אם השגתם אבקה דקה מאוד, תקבלו בסוף אבקה לבנה, וזהו התוצאה הרצויה, אך אין ללחוץ חזק מדי כדי לא לשבור את החיידקים.

לאחר מכן, לקחתי אמפולה של 10 ml של complete trans adjuvant, וווידאתי שכל החיידקים נמצאים בסוספנזיה. פתחתי את הדגימה הזו ושפכתי את כל 10 ml של ה-complete trans adjuvant אל המכתש, מעל ה-mycobacterium tuberculosis שפורק. כעת אניהעביר את ה-complete trans adjuvant המועשר אל מבחנה של 50 ml.

כעת אני לוקח את ה-trans adjuvant המשלים והמועשר ומעביר אותו למבחנה. כמובן, החיידקים נמצאים בתחתית הנוזל, ואנסה להוציא את מרביתם אל המבחנה. אך אם יישארו חלקם במיתר, זה לא יהווה בעיה משמעותית כיוון שאשתמש במיתר זה שוב, ללא ניקוי, כדי להכין את תחליב נוכח השAcknowledgments של חוט השדרה.

כאן נמצאים שרירי השוקע (spinal cords). הם נשמרו בהקפאה בטמפרטורה של minus 80. שקלתי 10 grams מהם כדי להוסיף ל-10 mls של האג'ובנט (adjuvant) המועשר שלי.

כעת, בעוד אני שומר על חוט השדרה קפוא ככל האפשר, אני אקצוץ אותו דק מאוד בתוך כלי השקילה באמצעות להבי תער. כדי לקצוץ את חוט השדרה לדקיקים, יש להשתמש בשני להבי תער ובכלי שקילה. אני לוקח חוט שדרה אחד, מניח אותו בכלי השקילה ומתחיל לחתוך אותו; אני מכסה את הכלי בידי מכיוון שבשל היותו קפוא, הרקמה נוטה לקפוץ, ולכן אני אוסף תחילה חתיכות גדולות. הרקמה תתחיל להפשיר במהירות ולהידבק לצד להב התער.

לכן אני משתמש בלהב תער אחר כדי להוציא אותו, ואני מנסה לקצוץ אותו באופן דק ככל האפשר ובמהירות רבה ככל האפשר כדי שלא יהיה לו זמן להמיס, מכיוון שקשה הרבה יותר לחתוך אותו לאחר שהמיס. לכן, חשוב ביותר שחוט השדרה יהיה קצוץ לחלוטין, בצורה דקה מאוד, ככל שהקיצוץ יהיה דק יותר, כך ההחדרה תהיה הומוגנית יותר, ויותר חולדות יחלו עם מחלה הומוגנית יותר. לכן, חשוב מאוד לקצוץ את כל חוטים השדרה הללו היטב, היטב.

כעת אמשיך לקצוץ את כל חטבלי השדרה באותה הדרך בדיוק עד לסיום כל 10 grams של חוט שדרה. כעת אערבב מעט את חוט השדרה במכתש כדי לוודא שאני אוסף את כל ה-mycobacterium tuberculosis שנותר במכתש לאחר שסיימתי להוסיף את העזר (adjuvant). השלב הבא יהיה להניח את העזר על הוורטקס.

בזמן ערבול רציף במערבל (vortex) במהירות המקסימלית, אני אוסיף את הריסוק של חוט השדרה למסייע (adjuvant) באופן הדרגתי. כעת המסייע המועשר נמצא על המערבל, ואני אתחיל להוסיף את ריסוק חוט השדרה במנות קטנות. הסיבה להוספה איטית מאוד של האנטיגן למסייע היא העובדה שאנו יוצרים אמולסיה של מים בשמן.

העזר הוא בעיקר שמן מינרלי, והאנטיגן הוא תמיסה שווה. לכן, מה שאנו רוצים לעשות הוא לערבב את האנטיגן לאט מאוד אל השמן, כך שהשמן יצפה את האנטיגן לחלוטין בכל פעם שנוסיף אותו. אם היינו מוסיפים אותו בבת אחת, הוא לא היה מצפה את האנטיגן באופן מלא.

כעת הוספתי את כל תמצית חוט השדרה למסייע (adjuvant) על הוורטקס, והשארתי את המבחנה על הוורטקס לסבוב של חמש דקות נוספות כדי להבטיח שכל הרכיבים יתערבבו לחלוטין. אני מכוונן את המהירות כך שאשיג את עוצמת הוורטקס הגבוהה ביותר האפשרית מבלי לאבד כמות רבה מדי מהנוזל במבחנה. כעת, לאחר שחלפו חמש דקות נוספות של ערבוב בוורטקס, אני עוצר את המכשיר ומעביר את התערובת למזרקים מזכוכית.

כעת הרכבתי מזרק מלא. חיברתי אותו לגשר בעל הקוטר הגדול יותר, ולצדו השני של הגשר חיברתי רק את גוף המזרק של מזרק אחד, וכעת אני עומד להוסיף את האמולסיה למזרק זה. כעת, לא.

כעת אעביר את כל הנוזל למזרק התחתון, אנתק את המזרק העליון, אסיים להרכיב אותו, ואוודא שאין בועות אוויר במזרק התחתון או בגשר. כעת אחבר אותם שוב. כך שעתה שני המזרקים מחוברים זה לזה באמצעות גשר זה.

אחת מלאה בתמיסה, והשנייה ריקה. וכעת אדחף במהירות המרבית את בוכנת המזרק האחת לשנייה והלוך וחזור. כעת אחליף את הגשר בעל הקוטר הגדול לגשר קטן יותר, בגודל 18 G.

הגשר הקטן יותר יהפוך את האמולסיה לסמיכה עוד יותר. לכן, כדי להחליף גשרים, אני מעביר את כל האמולסיה למזרק אחד. אני מסיר את המזרק הריק, מוודא שאיNothing אבד בתוך הגשר, מסיר את הגשר, מרכיב את הגשר החדש, מוציא את כל בועות האוויר ומחבר מחדש את המזרק השני.

ואני חוזר על הפרוצדורה, שעתה קשה הרבה יותר לעבור דרך האמולסיה, ואני נזהר שלא לשבור את הגשר הזה, שהוא שברירי מאוד. ואני חוזר על הפרוצדורה הזו עם סט נוסף של מזרקים כל עוד יש לי אמולסיה בשפופרת. לכן, אני משתמש במספר המזרקים הדרוש כדי לנצל את כל האמולסיה.

כעת ערבבתי את האמולסיה מספר פעמים, אולי 10 או 15 פעמים, אך זה משתנה בין הסדרות השונות. ועכשיו נהיה קשה מאוד להעביר את הערבוב. אעשה זאת פעם או פעמיים נוספות, ובכן, או אולי שלא.

זה ממש תקוע עכשיו, אז אני אשאיר את זה שם. אחרת, קיים סיכון לשבירה של המזרק או של הגשר. לכן, כאשר זה מפסיק לעבור, אם זה קורה בשלב מוקדם מאוד, המשמעות היא שייתכן שהגשר סתום.

אך בנקודה זו, מכיוון שערבבתי את התערובת לפחות 10 או 15 פעמים, פירוש הדבר הוא שהאמולסיה מוכנה. היא סמיכה מאוד, לכן עליי להניח לה. כעת אני עוטף אותה בנייר אלומיניום ומכניס למקרר למשך הלילה.

אתמול הכנו את האמולסיה עם חוט ששירה אדומים והשארנו את האמולסיה למשך הלילה במקרר. היום אנו מוציאים אותה ואנו עומדים להזריק 200 µL לכל חולדה בבסיס הזנב. אך לפני ההזרקה, עלינו לוודא שהאמולסיה תקינה.

לכן זה עדיין צריך להיות מוצק, וזה אכן מוצק ויפה. הסדק שרואים כאן אף מעיד על כך שזהו מוצק טוב, ושהוא לא התפצל לשני מופעים, מה שהיה מהווה בעיה. לכן, אמולסיה זו טובה לשימוש.

לכן, כל לולב יקבל 200 µL מהאמולסיה שלנו. כדי להזריק אותה, אנו משתמשים במזרקים של 3 מ"ל, אך אנו מוודאים שאנו משתמשים במזרקים עם חיבור Luer Lock, מכיוון שבמזרקים עם חיבור Luer Slip, בשל הסמיכות הרבה של האמולסיה, המחט עלולה להשתחרר במהלך ההזרקה.

לכן, השתמשו תמיד במזרק מסוג Luer-lock. באשר למחט, ננסה להשתמש במחט הקטנה ביותר האפשרית, אך עבורת emulsion סמיכה זו, עלינו להשתמש במחט בכיל 20. מכיוון שעלינו להזריק בדיוק רב לבסיס הזנב, אנו מרדימים את החולדות למספר דקות וננצל את העובדה שהחולדות ישנות עמוקות כדי לסמן אותן.

אנו משתמשים בנקבי אוזן, וכל חולדה מזוהה לפי דפוס נקובים ספציפי. כעת אנו מוכנים להזריק לחולדות, ונחדיר לכל חולדה 200 µL של אמולסיה לבסיס הזנב, ובמקביל נסמן את האוזניים. אני מכינה את האמולסיה במזרק ההזרקה עבור חולדה אחת בלבד בכל פעם, כיוון שלעתים ההזרקה קשה מאוד ואני לוחצת בעוצמה, ואני מעוניינת למנוע הזרקה של כמות גדולה מהנדרש לכל חולדה.

לכן אני ממלא את המזרק עבור יחידה אחת בכל פעם. כדי למלא את המזרק, אני מחבר את מזרק ההזרקה מפלסטיק לגשר המחובר בעצמו למזרק הזכוכית המכיל את האמולסיה. אני מכניס כ-300 µL של אמולסיה למזרק הפלסטיק שלי.

לאחר מכן אני מחבר את המחט ולוחץ כדי להוציא את האוויר ממנה, כדי שלא אאבד את 50 µL של הנפח המת שבמחט. אני מוודא שיש לי בדיוק 200 µL, ואז אני מזריק זאת לבסיס זנבה של החולדה. כעת, לאחר שהזרקנו לכל הלבבות שלנו, נבצע להם מעקב יומי.

לפיכך, נשקול אותם מדי בוקר ונבדוק אותם פעמיים ביום כדי לזהות סימנים קליניים ל-EAE. הסימנים הראשונים, כפי שאראה לכם כאשר יופיעו, יהיו זנב רפוי, ואנו מצפים לראות סימנים אלו בחלק מהחולדות סביב היום השביעי או השמיני לאחר ההזרקה. רוב החולדות יחלו סביב יום 10 עד יום 12, והחולדות האחרונות יחלו סביב יום 15 עד 17.

אנו נמצאים כעת ביום ה-13 לאחר שהחדירנו ללבבות שלנו את אמולסיית השריר השדרני, וכעת אעקוב אחר החיות כדי לבדוק את הדירוג הקליני שלהן. אך לפני כן, הרשה לי להציג בפניכם את אופן השכון של החיות שלנו. במחלות אוטואימוניות, קיים מאפיין זה שכל פתוגן שיהיה נוכח בבעל החיים יפחית את התגובה האוטואימונית.

כדי למזער זאת ככל האפשר, אנו מחזיקים את החולדות שלנו בתנאים ספציפיים. הן שוכנות בתא זה, המכיל אוויר מסונן ונמצא תחת לחץ חיובי, כאשר בעלי החיים עצמם שוהים בכלובים שעברו עיקור באוטוקלאב. לכן, כל פריט בתוך הכלוב עובר עיקור באוטוקלאב לפני הנחת החולדה בתוכו.

ועליהן של הכלובים מורכבים מסננים. המזון הוא מזון סטנדרטי למכרסמים. הוא מקורי.

אנו מספקים לחולדות שלנו גם מים מוחמצים. אנו לוקחים מי שתייה רגילים ומוסיפים חומצה כלורית בהתאם לפרוטוקולים סטנדרטיים, ואנו משתמשים במים מוחמצים כדי להגביל את הפלורה המעית למינימום, דבר שיפחית את הסיכון לפגיעה בתגובה האוטואימונית שלנו. כעת אני מוכן לבצע את הדירוג הקליני של החולדות שלי.

סולם הניקוד נע בין ציון אפס, המציין היעדר סימנים קליניים, לבין ציון שש, המציין מצב חמור שבו נשחית את בעלי החיים. כעת אדגים לכם שלב אחר שלב דוגמאות לכל ציון קליני שניתן למצוא במודל זה. אנו נמצאים כעת ביום ה-13 לאחר חיסון החולדות ב-UCAE.

ובכלוב הזה יש לי שני חולדות שטרם חלו. לכן, אין להן כל סימנים קליניים. כך ששתי החולדות עדיין בריאות.

הם נעים סביב, רצים, וכפי שניתן לראות, כאשר הם זזים, הם מרימים את הזנב מהמצע. לכן, לעיתים הם מאפשרים לזנב להתייבש, אך ברוב הזמן הם ינסו להרים אותו מהמצע. ואם תינתן להם ההזדמנות, הם גם יטפסו החוצה מהכלוב, מה שמעיד על כך שיש להם שליטה מלאה בכל ארבע הגפיים והם יכולים לעמוד אם הם זקוקים לכך.

אם כך, הסימן הקליני הראשון של EA הוא זנב רפוי. לכן, אם ארים חולדה ואלחץ עם האצבע על הזנב, לחולדה תהיה נטייה לתפוס בעזרת קצה הזנב. כפי שראיתם כעת, לחולדה זו אין זנב רפוי, ואני יכול לבצע זאת גם עם השנייה.

הזנב תופס את האצבע, מה שאומר שלאותם חולדות יש תגובה זנבית מלאה. יש להן ציון קליני של אפס, מה שאומר שבעצם אין להן EAE כלל. כאן יש חולדה עם ציון קליני של 0.5.

לכן, אם רק תסתכלו על החולדה בתוך הכלוב, היא מתנהגת בצורה נורמלית לחלוטין – היא רצה מסביב, מטפסת על דפנות הכלוב – אך קצה הזנב מעולם אינו עולה מהמצע. ייתכן שלחולדה זו יש שיתוק חלקי של הזנב. לכן, מה שאני עושה הוא תופס את החולדה ומבצע את אותה הבדיקה, ואף על פי שלזנב יש מידה מסוימת של טונוס, הקצה אינו נכרך לחלוטין סביב האצבע שלי.

לכן, אתן לחולדה זו ציון של 1.5, המעיד על שיתוק חלקי של הזנב. ציון קליני של 1 מאופיין בזנב רפוי לחלוטין, כך ששום חלק מהזנב אינו בעל טונוס, אך החולדה עדיין יכולה להשתמש ברגליה האחוריות. כפי שניתן לראות, חולדה זו עומדת נגד דופן הכלוב, מה שמעיד על כך שרגליה האחוריות מתפקדות באופן תקין.

אך אם אבדוק את זנבותיהם של החולדות הללו על ידי הרמתן, לא יהיה כלל טונוס בזנב שלהן. בדיקה נוספת שניתן לבצע היא כאשר ה-RU נמצא בתחתית הכלוב; אם תרימו את הזנב של RU עם ציון של אחת, הזנב יירד לאט או אולי אף לא יגיע לקרקע. אם תרימו את הזנב של RU נורמלי, הוא יסתמנו מיד אל הקרקע.

יחידה זו יכולה להניע את כל ארבעת הגפיים, אך הגפיים האחוריות חלשות מדי מכדי לאפשר ליחידה זו לעמוד. לכן, אסווג יחידה זו עם ציון קליני של שניים. ההבדל העיקרי בין ציון אחד לשניים הוא שציון אחד מייצג רק זנב רפוי.

הרגליים האחוריות תפקודיות לחלוטין, ובציון של שלוש, החולדה הייתה נופלת על צדה. שני הוא ציון ביניים, כך שהחולדה יכולה להשתמש בגבה, ברגליים האחוריות שלה, אך הן חלשות בהרבה מאלה של חולדה רגילה. לכן, בחולדה זו קיים מאפיין חריג של EAE.

בדרך כלל EAE מאופיינת כשיתוק רפוי עולה, אך במקרים מסוימים, שהם נדירים למדי, כמו במקרה זה, החולדות מפתחות תחילה שיתוק בגפיים הקדמיות לפני שהגפיים האחוריות משתקות. וזהו המקרה של חולדה זו. אם תסתכלו עליה, ראשה נמוך יותר משאר גופה מכיוון שהיא חווה קשיים בגפיה הקדמיות ואינה מסוגלת לטפס על דופן הכלוב.

ולמרות שגפיו האחוריות פועלות כסדרן, הוא אינו מסוגל לדחוף עם גפיו הקדמיות. לכן, אני עדיין אקבע לחולדה זו ציון של שתיים, מה שיתאים לשיתוק קל, על אף שבדרך כלל אנו רואים זאת בגפיים האחוריות ב-RU זה, אך כאן אנו רואים זאת בארבע הגפיים. לפיכך, ל-RU זה יש פנוטיפ חמור בהרבה מהקודמים.

הציון הקליני הוא שלושה. כפי שאראה לכם, הגפיים הקדמיות מתפקדות באופן נורמלי לחלוטין, אך בשתי הגפיים האחוריות קיימת פראזיס מתונה. לכן, בעיר השכבה (RU) יכולה להשתמש בשתי הגפיים האחוריות כדי לנוע, אך היא נופלת על צדה ואינה יכולה לשלוט באופן מלא ברגליים אלו.

נבגים אלה הופכים לחלשים הרבה יותר מכפי שהיו בדרך כלל ללא EE. ובשלב זה, איננו דואגים עוד מרפיון של הזנב, מכיוון שרבים מהחולדות הללו מתחילים לאחר זמן מה לפתח זנב קשוח מאוד. אחת זו עדיין בעלת זנב רפוי מאוד, אך לעיתים ניתן להבחין בדיסטוניה. לפיכך, הזנב מתחיל לנוע באופן לא מתואם.

לכן, בשלב זה איננו בוחנים יותר את הזנב, אלא רק את תפקוד הגפיים. נקיד לכך ציון של 3.5, מכיוון שאם נבחן את גפיו האחוריות, אחת נעה, אך השנייה משותקת לחלוטין ואינה מסייעת כלל בתנועה של החולדה קדימה. לפיכך, הדבר נחשב כשיתוק מלא של גפה אחורית אחת, ולכן הציון הוא 3.5.

ליחידה זו יש ציון קליני של ארבעה, שמשמעותו שיתוק מלא של הגפיים האחוריות, דבר המאופיין בחוסר יכולת מוחלט להניע את הרגליים האחוריות. לחולדה שנמצאת בכלוב זה יש ציון קליני של חמש, מה שמת corresponds לשיתוק מלא של הגפיים האחוריות בתוספת חוסר שליטה על סוגרים. בעל חיים זה סובל מחוסר שליטה על הסוגרים, כפי שניתן לראות, ישנו רטיבות מוחלטת באזור זה, דבר שאיננו רואים בבעלי החיים האחרים שאינם סובלים מחוסר שליטה על הסוגרים.

כאשר מדדי ה-HUS שלהם הם שלושה או יותר, אנו מספקים להם בקבוקי מים עם צינורות שתייה ארוכים כדי להבטיח שהם יוכלו להגיע למים. כמו כן, אנו מניחים מזון בתחתית הכלוב ומספקים להם חבילות ג'ל. למרות כל זאת, בכל פעם שאנו מוציאים את החולדות כדי לנטר אותן, פעולת שנעשית פעמיים ביום, אנו תמיד מציעים להם מים למקרה שלא שתו מספיק במהלך היום.

כאן יש לי חולדה עם ציון קליני של ארבע. בשלב זה, יש לעודד את החיות הללו מעט לאכול. לכן, מה שאני עושה הוא להרטיב את המזון שלהן, מה שמקל עליהן מאוד ללעס אותו.

במהלך השבועיים האחרונים, הראיתי לכם כיצד להשרות ולנטר EAE כרוני עם התסיעויות בחולדות DA. בשלב הראשון, הראיתי לכם כיצד להכין את תמצית השקע של חוט השדרה, ולאחר מכן כיצד להזריקה אותה בבסיס הזנב של החולדות הללו. והיום הראיתי לכם כיצד לדרג את החולדות הללו על פי רמות שונות של המחלה.

כמובן, זהו מודל כרוני עם התסימוים חוזרים, ולכן אנו מצפים שציוני החולדות ישתנו. המחלה תעבור להסגה תוך מספר ימים ותחזור להופיע עם הזמן. חלק מהחולדות יעברו לשלב כרוני יותר של המחלה.

זה ישתנה מבעל חיים לבעל חיים. כעת, לפני שנסייים את הסרטון, אני רוצה להדגיש נקודה אחת לגבי בדיקת תרופות במודלים אלו. הנקודה החשובה ביותר היא לבצע רנדומיזציה של בעלי החיים בצורה הטובה ביותר האפשרית.

דבר אחד חשוב מאוד שיש לדעת הוא שככל שהחיה מחלה מוקדם יותר, כך מחלתה חמורה יותר. לכן, אין לרכז את כל חיות הביקורת ביום הראשון ואת החיות המטופלות בימים הבאים. מה שאנו עושים הוא שברגע שחיה מחלה וביום שבו אנו רוצים להתחיל בטיפול, אנו מחלקים את החיות באופן אקראי לשתי קבוצות שונות.

אם יש לנו, למשל, קבוצת ביקורת אחת וקבוצה אחת שעברה טיפול, הלב הראשון ייכנס לקבוצת הביקורת, השני לקבוצה שעברה טיפול, וכן הלאה עד שכל בעלי החיים ישובצו בקבוצה שלהם. אנו מוודאים שאקראיות זו מתבצעת בשלב מוקדם ככל האפשר בפרוטוקול. אני מקווה שסרטון זה היה מועיל עבורכם ושתוכלו להשרות ולנטר EAE כרוני חוזר בחולדות D.

ובהצלחה בניסויים שלכם.