נוהל לימוד החזרה Footshock-induced של קוקאין מחפשים אצל חולדות מעבדה

הסרטון הזה מדגים הליך למחקר שיטתי של הקשר בין מתח והישנות לחיפוש קוקאין. בחולדות מעבדה, החולדות מאומנות תחילה לתת קוקאין תוך ורידי על ידי ביצוע תגובת לחיצת מנוף על פני מספר מפגשים יומיים במהלך השלב החשוך או הפעיל של מחזור חושך בהיר של 12 שעות. לאחר מכן, תגובת לחיצת הידית המחוזקת בקוקאין נכבית במשך מספר מפגשים על ידי מניעת חיזוק מותנה של תגובה.

התנהגות הלחיצה על הידית הכבויה חוזרת לאחר מכן על ידי חשיפת בעלי חיים להלם רגליים לסירוגין מיד לפני שניתנת להם גישה לידית המחוזקת בקוקאין בעבר. למרות שהלם רגליים המושרה על ידי החזרת חיפוש קוקאין היא השפעה שהושגה באופן מהימן על ידי מספר קבוצות מחקר, היא יכולה להיות רגישה למשתנים פרמטאליים מסוימים. הפרוטוקול שנתאר משקף את המאמצים המוצלחים שלנו לייעל את הפרמטרים הללו להשגת החזרה אמינה וחזקה של חיפוש קוקאין בחולדות.

ניתן להשתמש בשיטות שאנו מתארים כאן היום ובווריאציות שלהן כדי לבחון שאלות מפתח בתחום ההתמכרות לסמים, ובמיוחד ניתן להשתמש בהן כדי לבחון את המנגנונים ההתנהגותיים והנוירוביולוגיים הבסיסיים המתווכים את הקשר בין מתח והישנות לחיפוש סמים. הציוד המשמש לחקר החזרת חיפוש קוקאין כתוצאה מהלם רגליים כולל קבוצה של תאים אופרנטיים סטנדרטיים שכל אחד מהם כלול בתוך מתחם מחליש קול. כל הציוד מסופק על ידי Med Associates Incorporated berated.

כל תא אופרנטי מצויד בשני מנופים נשלפים, שניהם מוגבהים 6.5 סנטימטרים מעל רצפת מוט נירוסטה. נורית גירוי לבנה ממוקמת ממש מעל מנוף אחד. מה שנקרא מנוף אקטיבי והתגובות על הידית הזו מביאים להארה בו-זמנית של אור הגירוי, והפעלה של משאבת עירוי הממוקמת על מדף ממש מחוץ לתא הקצה העליון.

בתוך מארז הנחתת הקול, המנוף השני, מה שנקרא מנוף לא פעיל, נותר מורחב בתא. לאורך כל הליכי הניסוי, התגובה על מנוף זה היא ללא תוצאות. לבסוף, כל תא מצויד לספק הלם חשמלי זרם קבוע, לסירוגין וניתן לבריחה דרך מערבל לרצפת מוט הפלדה.

כל תנאי הניסוי כמו גם הקלטה ואיחוד נתונים מתבצעים באמצעות ממשקים בין תאי הבדיקה למחשב מרכזי. הפעלת אמצע שותפים תוכנה. לפני כל מפגש יומי, המתרחש בשלב החשוך או הפעיל של מחזור החושך הבהיר, שקלו את החולדות בחדר הדיור ולאחר מכן העבירו אותן לתאים האופרנטיים.

24 שעות לפני הפגישה הראשונה של מתן עצמי של קוקאין אפשרו לחולדות להתרגל לתאים האופרנטיים במהלך מפגש יחיד של שעתיים. במהלך מפגש זה, הידית האקטיבית נסוגה והידית הלא פעילה מורחבת בתחילת האימונים היומיים, מחברים מכלול קפיץ וצינורות לצינורית המותקנת על הגולגולת ומניחים את החולדה בתא האופרנט. הצינורית מחוברת לצנתר סלסטה שהושתל בניתוח בווריד הצוואר הימני כדי לאפשר מתן תרופות תוך ורידי.

אפשר לחולדות לתת קוקאין בעצמן במהלך מפגשים יומיים של שלוש שעות במשך שמונה עד 10 ימים בסך הכל. הקדימו כל אימון בתקופת התאקלמות של חמש דקות שבמהלכה מניחים בעלי חיים בתאים האופרנטיים כשהידית הפעילה נסוגה. כדי להתחיל אימון, הושט את הידית הפעילה לתוך החדר והאיר את נורית הגירוי למשך 30 שניות.

בנוסף, הפעילו את תאורת הבית בשלב זה ודאגו שהיא תישאר מוארת לאורך כל הפגישה. יחד האירועים הללו מאותתים על זמינות הקוקאין במהלך הסשן. התגובות על הידית האקטיבית מתחזקות על ידי עירוי של שלוש שניות של קוקאין ביחס קבוע, לוח זמנים אחד של חיזוק במקביל להפעלת העירוי, המשאבה ואספקת התרופות הוא הפעלה 22 של אור הגירוי מעל הידית הפעילה.

מצגת אור 22 זו מתאימה לתקופת פסק זמן שבמהלכה נרשמות תגובות מנוף אקטיביות נוספות אך אינן מחוזקות. במהלך כל מפגש של שלוש שעות, מותר לבעלי חיים מקסימום 50 עירויים כדי להפחית את הסבירות למנת יתר. בסוף כל מפגש יומי, שטפו את הצנתרים של החולדה ב-0.2 עד 0.3 מיליליטר של תמיסת הפרין דקסטרו ולאחר מכן החזירו אותם לכלוב הביתי שלהם.

לאחר הפגישה האחרונה של הטיפול העצמי בקוקאין, השאירו את החולדות ללא הפרעה בכלוב הביתי שלהן למשך חמישה עד שבעה ימים לפחות כאשר הזמן הזה חלף. העבירו את החולדות לתאים האופרנטיים לאימוני הכחדה התואמים את תנאי האימון. הקדימו כל יום של אימוני הכחדה בתקופת התאקלמות של חמש דקות שבמהלכה בעלי חיים מונחים בתאים האופרנטיים כשהידית הפעילה נסוגה.

לאחר מכן תנו לחולדות ארבעה מפגשי הכחדה של 60 דקות המופרדים במרווחים של 30 דקות. כל מפגש של 60 דקות מתחיל על ידי אותם אירועים המתרחשים בתחילת מפגשי ההדרכה לאורך כל המפגשים. שמור על כל התנאים שהיו קיימים במהלך האימון, למעט אל תחזק יותר את תגובות המנוף האקטיביות עם עירויי קוקאין במהלך מרווחי הזמן של 30 הדקות המפרידים בין כל סבב הכחדה של 60 דקות.

החזר את הידית הפעילה וכבה את תאורת הבית בסוף 60 הדקות האחרונות. החזירו את החולדות לכלוב הביתי שלהן. צעדים אלה חוזרים על עצמם במשך שלושה ימים רצופים.

העבירו את החולדות לתאים האופרנטיים כפי שנעשה בשלב ההכחדה בהתאם לתנאי האימון וההכחדה. ספק תקופת התאקלמות של חמש דקות במהלכה ממקמים חולדות בתאים האופרנטיים כשהידית הפעילה נסוגה. לאחר מכן תנו לחולדות שני מפגשי הכחדה של 60 דקות המופרדים במרווח של 30 דקות זהה לאלה שניתנו בשלב ההכחדה.

אם לאחר הפגישה השנייה של 60 דקות, המספר הכולל של התגובות על הידית הפעילה בעבר הוא פחות מ-15, יש לבצע מבחן להחזרה לאחר מרווח של 30 דקות נוספות שבמהלכו ניתן שוק חשמלי בכף הרגל או שוק כף רגל מדומה. החל מ-10 דקות לאחר סשן ההכחדה השני של 60 דקות, חשוף בעלי חיים ל-20 דקות של הלם חשמלי לסירוגין, לחץ או הלם כף רגל מזויף בתא הניתוח. נהל הלם כף הרגל בזמן שבו הידית הפעילה נסוגה ואורות הבית והגירוי כבויים.

מיד לאחר סיום מפגש ההלם בכף הרגל, האריך את הידית הפעילה ואפשר לחולדה ללחוץ על מנוף בתנאי הכחדה. פרק זמן זה מוגדר כמבחן ההחזרה ואורכו בדרך כלל שעה עד שלוש שעות. בתום מפגש הבדיקה, הוציאו את החולדה מהתא והחזירו אותה לכלוב הביתי שלה.

כעת נציג כמה תוצאות מייצגות. מוצגת כאן עקומת אימון טיפוסית לניהול עצמי של קוקאין הכוללת את המספר הכולל של עירויים ואת המספר הכולל של לחיצות כבד פעילות ולא פעילות. חולדות בדרך כלל רוכשות מתן עצמי של קוקאין תוך מפגש אחד עד שלושה, וברגע שההתנהגות מתבססת, שומרות על קצב יציב של צריכת סמים במהלך הפגישות הבאות ביום הראשון להכחדה.

כאשר התגובות אינן מחוזקות בפעם הראשונה, המספר הכולל של התגובות על הידית הפעילה הוא בהתחלה גבוה מאוד, אך יורד בהדרגה במהלך ארבעת מפגשי ההכחדה בימים השני והשלישי של ההכחדה. ניתן להבחין בהתאוששות מסוימת של תגובה, עם זאת, התגובות בדרך כלל פחותות מאשר בתחילת היום הקודם של ההכחדה וההכחדה בדרך כלל מתקדמת מהר יותר במהלך ארבעת המפגשים של אותו יום. תגובה לא מחוזקת על הידית הפעילה.

לאחר 20 דקות של חשיפה לזעזוע כף רגל לסירוגין, מתח גורם לעלייה בתגובה על הידית הפעילה בעבר ביחס למנוף הלא פעיל. הלם כף הרגל גורם גם לעלייה בתגובה ביחס לזו שנצפתה. בתנאים בהם ניתן גיר כף רגל דמה לאחר שליטה, ניתן להשלים את ההליכים המתוארים תוך כשישה שבועות.

מניסיוננו, ההצלחה אופטימלית כאשר ההליך מתבצע באופן שיטתי ועל ידי ידיים מיומנות היטב. ניתן להתאים בקלות את ההליכים שתיארנו כאן כדי להתאים למניפולציות פרמקולוגיות או נוירוכימיות שונות המכוונות למצעים עצביים ספציפיים. בתוספת מניפולציות כאלה, הליך השראת הלם כף הרגל וההצהרה יכול לשמש ככלי רב עוצמה לאפיון הנוירוביולוגיה של נטילת תרופות הכחדה וחזרה לחיפוש סמים על ידי לחץ.