Name: אינדוקציה וניטור של רגישות יתר פעילים סוג מושהית (DTH) בחולדות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 26 s
Description: למד אינדוקציה של רגישות יתר פעילים סוג מושהית (DTH) בחולדות Lewis באמצעות אמולסיית אנטיגן KLH ו-Freund's adjuvant. שיטה זו מאפשרת מדידת תגובה דלקתית באמצעות הערכת נפיחות לאתגר החיסוני.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

1. הכנת התחליב <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התחליב הוא תערובת 01:01 של אנטיגן (DTH יכול להיגרם אנטיגנים שונים: ovalbumin, הוסיף טטנוס toxoid, חור המנעול עלוקה hemocyanin ....) בתמיסה מימית כדי להשלים adjuvant של פרוינד. חשוב מאוד להוסיף את אנטיגן כדי adjuvant ולא להיפך! </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש הרבה פסולת בעת ביצוע והזרקת אמולסיה, ולכן תמיד להכין 1.5 או פי 2 יותר ממה שאתה צריך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממיסים אנטיגן מלוחים להכין 2 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​פתרון. לא לסנן, כמו שאתה לא רוצה לאבד המצרפים! </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים להשלים adjuvant פרוינד של H37Ra (Difco, קטלוג # 231131) בצינור ואת המערבולת במהירות גבוהה. הוסף את הירידה אנטיגן על ידי ירידה בעוד vortexing. כאשר כל אנטיגן הוא הוסיף, מערבולת במשך 5 דקות נוספות. התערובת צריכה להלבין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את התחליב של מזרק זכוכית ולקשר אותו מזרק עוד כוס באמצעות גשר 18G (קטלוג פישר # 14-825-17L). שלח את התחליב של מזרק לצד השני עד שהוא הופך קשה (50-10 דקות). מומלץ להשתמש בשני מזרקים 5 מ&quot;ל. אם יותר מ -5 מ&quot;ל תחליב נדרשים, השתמש במספר קבוצות של 5 מ&quot;ל מזרקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התחליב ניתן לאחסן מזרקים ב 4 ° C למשך 3 שבועות. </li></ol> 2. חיסון של החולדות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים את התחליב של מזרקים במשך כמה דקות ומעבירים מזרק המשמש הזריקה. להזריק 200 מ&quot;ל תת עורי ב 1-2 אתרי בבסיס הזנב באמצעות מחטים 23G ו Luer-Lok קצה מזרק 3 מ&quot;ל. </li></ol> 3. האתגר עם אנטיגן בגב <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שבעה ימים לאחר חיסון, לגלח 2 נקודות על גבם של החולדות ולהזריק intradermally 20 מ&quot;ל של פתרון מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​1 אנטיגן בנקודה אחת מלוחים (או אנטיגן רלוונטי) במקום השני. האם לא לסנן את הפתרון אנטיגן, כפי שאתה עלול לאבד אגרגטים המשפרים את התגובה הדלקתית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חולדות צריכות להיות anesthesized כדי למנוע תנועות. להזריק את הפתרון באמצעות intradermally 27G ½ 1 מחטים ומזרקים מ&quot;ל. שנה מחטים בין זריקות. הערה: את האתגר אפשר לעשות פינה של האוזניים במקום האחורי למדידות יותר מדויקות. ראה וידאו <a href="/index/Details.stp?ID=325">https://www.jove.com/index/Details.stp?ID=325</a> </li></ol> 4. מדידה של DTH <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> האתר הזרקת יתחיל מאדימים ונפיחות כסימן של דלקת. מדוד את הקוטר של האזור דלקתי באמצעות סרגל או, עדיף, קליפר. נפיחות המקסימלי אמור להתרחש בין 24 ל 72 שעות. </li></ol>

<ol>
	<li>Beeton, C., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+and+monitoring+of+adoptive+delayed-type+hypersensitivity+in+rats.">Induction and monitoring of adoptive delayed-type hypersensitivity in rats.</a> Journal of Visualized Experiments. 8, (2007).</li></ol>

המחברים הם מייסדי ויועצים עבור Airmid בע&quot;מ

עבור מדידה מדויקת יותר של תגובת DTH אנו ממליצים תיגר על חולדות עם האנטיגן בתוך פינה של האוזן. התגובה אז יכול להיות, כפי שהיא נמדדת הבדל בין נפיחות באוזן האוזן אנטיגן תיגר רלוונטי האוזן תיגר עם מלוחים לבד או עם האנטיגן רלוונטי. הפגנה של האתגר באוזן מוצג 1.

השתמש סטרילי פתרונות ריאגנטים מזרקים. מזרקים הזכוכית וגשרים 18G ניתן autoclaved. קרא את גיליון נתונים חומר לפני הטיפול מגיב לראשונה ללבוש ציוד מגן מתאים.

אינדוקציה וניטור של רגישות יתר פעילים סוג מושהית (dth) בחולדות

Induction and Monitoring of Active Delayed Type Hypersensitivity (DTH) in Rats

סוג של רגישות יתר מאוחרת (DTH) היא תגובה דלקתית בתיווך CCR7-T לימפוציטים מפעיל זיכרון לחדור את האתר של הזרקה של אנטיגן נגד שבו המערכת החיסונית כבר דרוך. התגובה הדלקתית מאופיין אדמומיות ונפיחות של האתר של אתגר antigenic. זהו מודל נוח על מנת לקבוע את ביעילות vivo של מערכת החיסון. DTH עורית יכול להיגרם גם על ידי העברת המאמצת של אנטיגן ספציפי לערמונית לימפוציטים מסוג T או על ידי חיסון פעיל עם אנטיגן, והאתגר intradermal הבאים עם האנטיגן לעורר תגובה דלקתית באזור העור נתון. התגובות DTH יכול להיגרם אנטיגנים שונים, למשל ovalbumin, טוברקולין, טטנוס toxoid, או חור המנעול עלוקה hemocyanin (KLH). כאן אנו מדגימים כיצד לגרום תגובת DTH פעיל לואיס חולדות. אנחנו יהיה הראשון להכין תחליב מים בתוך שמן של KLH, אנטיגן שלנו של עניין, להשלים adjuvant של פרוינד להזריק תת עורי אמולסיה זו לחולדות. זו תהיה הממשלה את מערכת החיסון לפתח תאים T זיכרון מופנה KLH. שבעה ימים לאחר מכן נוכל לקרוא תיגר על חולדות intradermally על הגב עם KLH בצד אחד עם ovalbumin, אנטיגן רלוונטי, בצד השני. התגובה הדלקתית יהיה גלוי 16-72 שעות לאחר מכן ואזור אדום ונפוח תימדד כאינדיקציה לחומרת DTH.

סוג של רגישות יתר מאוחרת (DTH) היא תגובה דלקתית בתיווך CCR7-מפעיל לימפוציטים מסוג T זיכרון. כאן אנו מדגימים כיצד לגרום DTH פעיל חולדות לואיס לפקח על התגובה הדלקתית.

אינדוקציה וניטור של רגישות יתר פעילים סוג מושהית (DTH) בחולדות

רגישות מאוחרת (DTH) היא תגובה דלקתית המתווכת על ידי לימפוציטים T מסוג זיכרון אפקטורי המבטאים CCR7, אשר חודרים לאתר ההזרקה של...

שלום, אני כריסטין ביטון. אני עובדת במעבדה של ג'ורג' צ'נדי במחלקה לפיזיולוגיה וביופיזיקה ב-UCI. היום אראה לכם כיצד להשרות DTH פעיל בחולדות.לשם כך, אכין אמולסיה של KLH, המשמש כאנטיגן שלי, בתוך אדג'ובנט Freund. לאחר מכן, אזריק את האמולסיה לבסיס הזנב של חולדות Lewis. פעולה זו תגרום לחסינות של החולדות נגד KLH. לאחר שבוע, אבצע חשיפה חוזרת (challenge) של החולדות ל-KLH ואמדוד את תגובת ה-DTH על ידי מדידת הנפיחות.זהו אתר האתגר, ואנו משתמשים בו במעבדה כדי לבחון את ההשפעה של חוסמי תעלות PO על תגובות דלקתיות כגון DTH. כאן נמצא העזר למערכת החיסון (adjuvant) הבלתי שלם שאשתמש בו כדי להכין את האמולסיה. ניתן להשתמש גם בעזר למערכת החיסון השלם.כאן נמצא ה-KLH, שהוא האנטיגן שלי היום, ויש לי כאן תמיסה בריכוז של 2 mg/ml ב-PBS. אני אשתמש במזרק של 5 ml כדי להוציא את ה-incomplete trans adjuvant ולהעבירו למבחנה של 15 ml. לאחר מכן, אני אניח את המבחנה על הוורטקס ובזמן הערבוב, אוסיף את האנטיגן שלי טיפה אחר טיפה אל תוך ה-adjuvant.לאחר מכן, אבצע ערבוב במערבל Vortex למשך חמש דקות נוספות. בסיום הפעולה, אמלא מזרק זכוכית של 5 mL בתערובת; יש להשתמש במזרק זכוכית מכיוון שהעזר (adjuvant) נוטה להמיס פלסטיק. מצאנו כי מזרקים של 5 mL הם האידיאליים ביותר ליצירת האמולסיה.קטן יותר או גדול יותר אינם טובים באותה מידה. וברגע שמילאת

induction-monitoring-active-delayed-type-hypersensitivity-dth

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

סוג של רגישות יתר מאוחרת (DTH) היא תגובה דלקתית בתיווך CCR7-מפעיל זיכרון T (TEM) לימפוציטים. כאן אנו מדגימים כיצד להפעיל את אנטיגן ספציפי לערמונית תאים TEM, לגרום DTH המאמצת בחולדות לואיס לפקח על התגובה הדלקתית.

אינדוקציה וניטור של רגישות יתר מושהית-Type המאמצת בחולדות

כאן אנו להדגים שיטה גרימת הקלטה ההתקדמות של הצתה מאוחרת (DTH) סוג רגישות יתר באוזן חולדה. זה ואחריו הפגנה של הכנת רקמות האוזן עכברוש הדמיה שני הפוטונים של התגובה מפעיל T / תא זיכרון.

הדמיה מפעיל T זיכרון תאים באוזן לאחר אינדוקציה של DTH המאמצת

וידאו זה מראה כיצד לגרום hypophysitis אוטואימוניות בעכברים SJL וכיצד להעריך חומרתה ידי histopathology.

אינדוקציה של Hypophysitis אוטואימוניות הניסויי עכברים SJL

אנו מתארים assay אבחון יקר שעלולים לשמש כדי להחליט הנסיגה של דיכוי חיסוני לאחר השתלה ללא סיכון מוגבר לדחיית שתל. Assay משתמש בעקרונות של רגישות יתר מושהה סוג ומספק הערכה מדויקת של שתי התגובות רכובים על ידי מקבלי חיסון מפעיל ורגולציה הספציפיות תורמות.

Assay רגישות יתר מושהה סוג חוצה vivo להסדרת אנטיגן ספציפי

תגובות אלרגיות, המתאפיינות בהפעלת תאי מאסט ובזופילים, מונעות על ידי הקישור הצולב של IgE והשחרור של מתווכים מעודדי דלקת. הערכה כמותית של תגובות אלרגיות יכולה להיות מושגת על ידי שימוש בצבע כחול אוונס לעקוב אחר שינויים בחדירות כלי דם לאחר אתגר אלרגן.

מדידת אנפילקסיס המקומי בעכברים

כאן אנו מציגים שיטה חדשה כדי למדוד במדויק את הבדלי טמפרטורה גוף פסיבי אנפילקסיס מערכתית (PSA), מזון אלרגיה העכבר מודלים באמצעות מד חום אינפרא אדום... הליך זה שוכפל במדויק בתוצאות ה-PSA הקודמת.

מדידה טמפרטורת גוף העכבר באמצעות מד חום אינפרא אדום במהלך אנפילקסיס מערכתית פסיבי והערכה אלרגיה למזון

אנו מתארים מודל הפטיטיס חיסון in vivo בעכברי BALB/c שניתן להשתמש בו כדי לחקור את הפתוגנזה של הפטיטיס אוטואימונית הנגרמת על ידי תרופות, כולל הבדלי מין שנראו במחלה זו. נתאר כיצד מודל זה מדגים ניתוחים הניתנים לשחזור באמצעות טכניקות ניסיוניות in vivo ו- in vitro.

אינדוקציה של הפטיטיס אוטואימונית הנגרמת על ידי תרופות בעכברי BALB/c לחקר המנגנונים הפתוגניים שלה

רגישות יתר למגע (CHS) היא מודל ניסיוני של מורין של דרמטיטיס מגע אלרגי (ACD). CHS מבוסס על רגישות עם hapten תגובתי על ידי צביעת העור המגולח של החזה והבטן, עם אתגר עור אוזן לאחר מכן עם hapten מדולל, הגורם לתגובת נפיחות כי הוא מוערך בדרכים שונות.

צור רגישות יתר כמודל מורין של דרמטיטיס מגע אלרגי

המחקר מדגים את תפקידו של העור בוויסות התגובות החיסוניות בעכברים באמצעות חיסון אפיעורי (EC). חיסון EC עם אנטיגן חלבון יכול לדכא תגובות חיסוניות ברגישות יתר למגע או להפוך דיכוי המושרה על ידי העור בשילוב עם דפוסים מולקולריים הקשורים לפתוגן. חיסון EC מראה הבטחה כגישה יעילה ונטולת מחטים לאימונותרפיה.

מודל עכברי של אימונומודולציה המושרה אפיעורית

המאמצים לבודד את למקטע הקטליטית של telomerase, טרט, בכמויות מספיקות ללימודי מבניים, כבר נפגש עם הצלחה מוגבלת במשך יותר מעשור. כאן, אנו מציגים שיטות הבידוד של רקומביננטי Tribolium castaneum טרט...

ב הכינון במבחנה של ט פעילים castaneum שהטלומרז

למד אינדוקציה של רגישות יתר פעילים סוג מושהית (DTH) בחולדות Lewis באמצעות אמולסיית אנטיגן KLH ו-Freund's adjuvant. שיטה זו מאפשרת מדידת תגובה דלקתית באמצעות הערכת נפיחות לאתגר החיסוני.

אינדוקציה וניטור של רגישות יתר פעילים סוג מושהית (DTH) בחולדות

גלה סרטונים נוספים