העברה ויראלית ממוקדת לנוירונים קורטיקו-ספינליים בחולדה יילודים כדי לחקור פגיעה בחוט השדרה

התחל עם חולדה מורדמת עם חוט שדרה צווארי חשוף בניתוח.

לחולדה זו הוזרק נגיף אנטרוגרדי המקודד קולטן מעוצב וחלבון פלואורסצנטי שהנגיף מכוון לתאי עצב של מערכת הקורטיקו-שדרתית (CST) בקליפת המוח הסומטומוטורית.

זהה את קו האמצע של חוט השדרה באמצעות עורק עמוד השדרה.

מקם מחט זכוכית המכילה וירוס רטרוגרדי, המקודד אנזים רקומבינאז, מאחורי למינה עמוד השדרה הממוקדת שבה שוכנים מסופי אקסון CST.

הורד את המחט לחוט השדרה והזריק את הנגיף.

אפשר לנגיף להתפזר, ואז משוך לאט את המחט ותפור את החתך.

הנגיף נכנס למסוף אקסון CST ונוסע לאחור לגוף התא, שם הוא מבטא את האנזים רקומבינאז.

אנזים זה מפעיל את הטרנסגן המועבר על ידי הנגיף האנטרוגרדי, ומאפשר ביטוי של הקולטן המעצב והחלבון הפלואורסצנטי רק בתאי עצב נגועים כפולים. שיטה זו מאפשרת ניתוח ממוקד של נוירוני CST בפגיעה בחוט השדרה.

להזרקות ישירות לחוט השדרה, השתמש בקצה מחט הזרקת הזכוכית כדי להעריך את קו האמצע של חוט השדרה על ידי זיהוי עורק עמוד השדרה.

לאחר מכן, הנח את המחט ממש אחורית ללמינה C5 בקו האמצע המשוער והשתמש בזה כנקודת הייחוס. לאחר מכן, בעזרת המניפולטור המיקרו, הזיזו את המחט לרוחב ימינה ב-0.3 מילימטרים והורידו את המחט עד שהיא פשוט נוגעת במשטח חוט השדרה.

מעומק זה, צללו את המחט 0.6 מילימטרים לחוט השדרה. הזרקו מיקרוליטר אחד של הנגיף הקשור לרטרו אדנו-2 הנושא את הגן Cre recombi