מניפולציה של תאי צלחת עצבית באמצעות ננו-הזרקה ברחם במודל עכבר עוברי

אבטח עכבר בהריון מורדם עם הרחם החשוף שלו המכיל עוברים טרום-נוירולטיביים. בשלב זה, הצלחת העצבית פתוחה וחשופה ישירות למי שפיר.

מקם את העוברים שנבחרו על צלחת פטרי עם קרום אלסטי כדי לייצב אותם. אבטח את העוברים ומרח מי מלח להידרציה.

יישר את בדיקת האולטרסאונד מעל העובר ומדוד את קוטר חלל מי השפיר כדי לחשב את נפח ההזרקה האופטימלי.

מקם מחט הזרקת ננו המכילה תמיסה לנטי-ויראלית גבוהה מעל עובר המטרה בזווית כמעט מאונכת.

הזריק נפח קטן ומדויק לחלל מי השפיר, משוך בעדינות את המחט והסר את בדיקת האולטרסאונד.

דחף בעדינות את העוברים בחזרה לתוך העכבר.

נגיף הלנטי המוזרק מתמזג עם תאי צלחת עצבית, ומשחרר את החומר הגנטי שלו, שעובר שעתוק הפוך ל-DNA ומשולב בגנום המארח.

זה מאפשר מניפולציה יציבה של גנים בתאי הלוח העצבי, ותומך ביישומים טיפוליים פוטנציאליים.

בעזרת מלקחיים, החזיקו את הרקמה בין העוברים ושלפו בזהירות את שתי קרני הרחם מהבטן. ספור ומספר את העוברים, מהשחלה לצוואר הרחם או מצוואר הרחם לשחלה, משני הצדדים.

לאחר מכן, בעזרת צמר גפן לח, דחף בעדינות את כל העוברים בחזרה לחלל הבטן, למעט שלושת הראשונים שיש להזריק. לאחר מכן, הניחו טיפה של PBS על קרום אלסטי המודבק לפתח המרכזי העגול של צלחת פטרי שונה זמינה מסחרית והחזיקו אותה מיד מעל העוברים. הכנס מלקחיים סגורים לחתך האלסטי, ולאחר מכן שחרר את המלקחיים כדי לפתוח את החתך האלסטי, והפיל את הנוזל על העוברים.

בעזרת מלקחיים, משוך את חלק הרחם המתאים לשלושת העוברים דרך הגומי והניח בעדינות את צלחת הפטרי על בטן העכבר. בעזרת ארבע רגלי חימר, אבטחו והדקו את צלחת הפטרי מעל הבטן כדי להפחית את הלחץ על העכבר, וגם להפחית את רגישות ההדמיה לנשימה ולפעימות הלב של העכבר. לאחר מכן, בעזרת מלקחיים וצמר גפן לח, התאימו את הרחם ואת הגומי כדי להבטיח שהגומי אטום סביב עור העכבר, ומונע דליפת PBS.

לאחר מכן, כדי לקבע את הרחם, לחץ על גליל החימר הדוגמנות כלפי מטה מימין לעוברים או לרחם והוסף PBS לצלחת הפטרי עד שהעוברים והרחם מכוסים לחלוטין ב-PBS. כדי להקל על הקלטת הזריקות, טבלו את בדיקת האולטרסאונד ב-PBS והתאימו את העכבר או שולחן הניתוח כך שהעובר הראשון מיושר עם בדיקת האולטרסאונד. סרוק את כל שלושת העוברים ובדוק את חללי מי השפיר.

לאחר מכן, בעזרת מכשיר האולטרסאונד, מדוד את קוטר חלל מי השפיר כדי לקבוע את נפח ההזרקה המתאים. באמצעות בקר ההזרקה, הגדר את נפחי ההזרקה שנקבעו ואת מהירות ההזרקה להאטה, עם קצב הזרקה של 23 ננוליטר לשנייה. לאחר הורדת המחט לתוך ה-PBS, באמצעות הגלגלים הראשיים במערכת המסילה, לחץ על רוקן בבקר הננו-מזרק עד שהנוזל יגיע לקצה המחט.

לאחר מכן, הרם את המחט מה-PBS ולחץ על הזרקה כדי לוודא שטיפה בנפח הרצוי המשוער משוחררת. הורד שוב את המחט לתוך ה-PBS והזז את הננו-מזרק עם גלגל מישור ה-Y על המיקרומניפולטור כדי ליישר את המחט עם בדיקת האולטרסאונד והעובר. כוונן את זווית המחט עם גלגל זווית ההזרקה כדי להבטיח זווית הזרקה כמעט מאונכת ביחס לדופן הרחם.

לאחר מכן, באמצעות גלגל ההזרקה במיקרומניפולטור, הכנס את המחט לחלל מי השפיר בתנועה אחת. אם קצה המחט נעלם מתמונת האולטרסאונד, הזז את הגשושית קדימה או אחורה כדי להחזיר את המחט למיקוד. לאחר מכן, הזרקו את הנפח הרצוי על ידי לחיצה על הזרקה למספר הפעמים המתאים.

לאחר הזרקת הנפח הנדרש, המתן 5 עד 10 שניות לפני שתמשוך את המחט בתנועה עדינה אחת.

לאחר מכן, הרם את בדיקת האולטרסאונד והמחט מה-PBS באמצעות המיקרומניפולטור, וסובב את המחט מהמפעיל כדי למנוע נזק ופציעה.

בעזרת מלקחיים, הנח את העובר הראשון והשני בחזרה לבטן על ידי דחיפתם בעדינות דרך הגומייה.

לאחר הזרקת כל העוברים עם חללי מי שפיר אופטימליים, דחפו בעדינות את העוברים והרחם בחזרה לבטן העכבר.