העברת גנים לתאי שוואן של העצב הסיאטי של המכרסם באמצעות אלקטרופורציה

התחל עם חולדה מורדמת המונחת על כרית חימום עם עצב סיאטי חשוף.

הרם את האתר הדיסטלי של העצב והזריק תמיסת DNA פלסמיד מעורבבת בצבע. הצבע עוזר לעקוב אחר אספקת הפלסמיד

.

הניחו אלקטרודה מסוג פינצטה סביב העצב, תוך שמירה על רווח קטן בין זרועות האלקטרודה.

הכנס מי מלח לפער זה להולכה זרם.

הפעל פולס חשמלי המקיף את סיבי העצב היוצר נקבוביות ממברנה חולפות בתאי שוואן. לאחר מכן, הפוך את מיקומי האלקטרודה והחל דופק חשמלי שני. זה משפר את כניסת ה-DNA של הפלסמיד דרך הנקבוביות.

לאחר אלקטרופורציה, קרום התא אוטם מחדש ולוכד את הפלסמיד.

נקו את המקום, אטמו את חתך העור, חטאו אותו ואפשרו לחולדה להתאושש.

מאוחר יותר, ה-DNA של הפלסמיד עובר לגרעין ומשתלב ב-DNA של תא שוואן, ומאפשר העברת גנים מוצלחת.

משוך בעדינות את הצד הדיסטלי של העצב באמצעות מחט כדי להרים את העצב החשוף. הכניסו את המיקרו-פיפטה מזכוכית לאתר הדיסטלי על העצב, והזריקו את תמיסת ה-DNA על ידי הפעלת לחץ חיובי קל עד שהעצב נראה ירוק. לאחר מכן, הניחו אלקטרודת פלטינה מסוג פינצטה במרחק של כמילימטר עד שני מילימטרים מהעצב.

מלא את הפער בין האלקטרודה לעצב בתמיסת נתרן כלורי 0.9%. החל פולסים חשמליים על אתר ההזרקה באמצעות אלקטרופורטור. לאחר הגדרת הדופק הראשונה, הפוך את האלקטרודה והחל סט דופק נוסף.

לאחר מכן, נקה את אתר האלקטרופורציה עם תמיסת נתרן כלורי 0.9%. לאחר אלקטרופורציה, סגור את החתך עם דבק ציאנואקרילט. לאחר מכן, נקו את הפצע עם יוד פובידון.

הסר את מסכת הפנים מהחיה, ושמור אותה על המחמם החשמלי למשך שעה לפחות כדי לאפשר החלמה מלאה מההרדמה