העברת גנים בתיווך וירוס לגרעין השבלול הגבי של העכבר לגירוי שמיעתי המושרה על ידי אור

נתחיל עם עכבר מורדם עם גולגולת חשופה.

הגולגולת כוללת קרניוטומיה מעל העצם הבין-קודקודית, משמאל לקו האמצע, וזנב לתפר הכבש, כאשר הדורה הוסרה כדי לחשוף את המוח הקטן.

שאפו את המוח הקטן השמאלי הצדדי כדי לחשוף את גרעין השבלול הגבי הבסיסי או DCN, מבנה גזע המוח המכיל נוירונים המעבדים אותות שמיעתיים.

הוסיפו מי מלח כדי למנוע קרישת דם ולנקות שאריות נוזלים.

מקם מיקרו-מזרק המכיל וקטור ויראלי המקודד אופסין, תעלת יונים רגישה לאור.

הורד את המחט לתוך ה-DCN.

הזריק את התרחיף הנגיפי בקצב מבוקר, ולאחר מכן משוך את המחט.

תפרו את החתך ואפשרו לעכבר להתאושש.

הנגיף המוזרק נקשר לקולטנים עצביים DCN ועובר אנדוציטוזיס.

בתוך הגרעין העצבי, ה-DNA הנגיפי מעורר ביטוי גנים, מה שמוביל לייצור אופסין.

המודל מוכן לגירוי המושרה על ידי אור של מסלול השמיעה.

השתמש בצינור יניקה חמש צרפתי כדי לשאוב את החלק הצדדי ביותר של המוח הקטן השמאלי, מעל ה-DCN. כדי לתמוך בשאיפה, הגדר את מישור המוקד של המיקרוסקופ בעומק הצפוי של גרעין השבלול כדי לשפר את ההדמיה ולהבטיח תמונה חדה. הסר כרבע עד שליש מהמוח הקטן השמאלי.

נקודת הציון העיקרית הסמוכה ל-DCN היא האמפולה של התעלה החצי-עגולה העליונה. לאחר השאיבה יופיע דימום נוסף, הצטברות נוזל עמוד השדרה המוחי ותזוזה של המוח הקטן ב-DCN. יש להחדיר מי מלח במהירות לתוך הגולגולת כדי למנוע קרישת דם. השתמש בשילוב של טפיחה עדינה עם נקודת שיניים ויניקה כדי לפנות נתיב להדמיה ישירה של ה-DCN.

לאחר שה-DCN נראה בבירור וללא דם ו-CSF, בצע לתוכו הזרקת מיקרו לחץ של הווקטור עם מזרק המילטון אטום לגז של חמישה מיקרוליטר. השתמש במחט בגודל 34 עם שיפוע רדוד כדי למזער טראומה קהה ולמקם את נפח ההזרקה בתוך ה-DCN. לאחר מכן הכניסו לאט את המחט עם מניפולטור מיקרו עד שהקצה כבר לא נראה מתחת לפני השטח של ה-DCN.

התחל להזריק 1.5 מיקרוליטר של הווקטור. לאחר השלמת זה, משוך לאט את המחט, לאחר מכן הערך מחדש את העור ואפשר לעכבר להתאושש לפי הליך התאוששות סטנדרטי.