התחדשות אקסונלית בעצב הסיאטי של עכבר לאחר פגיעת ריסוק

התחל עם העצב הסיאטי המבודד מעכבר.

הנוירונים בתוך העצב עברו טרנספקט כדי לבטא חלבונים ציטופלזמיים פלואורסצנטיים.

העצב נמחץ כדי לגרום לפציעה, שסומנה בתפר.

מקטעי האקסון הפגועים באתר מתנוונים, ומקרופאגים מגויסים מפנים את הפסולת.

תאי שוואן מתרבים כדי ליצור מסלולים מנחים ומפרישים גורמים נוירוטרופיים המקדמים צמיחה מחודשת של אקסונים. האקסונים משתרעים לאורך המסלולים הללו, ומחדשים את העצב.

תקן את העצב כדי לשמר מבנים תאיים, ואז הסר את כל הרקמות הלא עצביות המחוברות.

יש לשטוף עם מאגר כדי לחסל שאריות קיבוע

.

מקם את העצב על שקופית מיקרוסקופ, החל מדיום הרכבה והנח כיסוי.

שטח את העצב כדי למקם את האקסונים באותו מישור מוקד להדמיה.

בעזרת מיקרוסקופ אפיפלואורסצנטי, עקוב אחר האקסונים מאתר הריסוק לקצותיהם הדיסטליים כדי

למדוד את אורך ההתחדשות.

הפרד את ה-DRGs יחד עם שורשי העצבים והעצב הסיאטי, בזהירות עם מיקרו מספריים ומיקרו מלקחיים מתחת למיקרוסקופ הדיסקציה.

לאחר מכן, העבירו את העצב הסיאטי ישירות ב-4% PFA למשך הלילה בארבע מעלות צלזיוס. כדי לדמות ולמדוד את האקסונים החושיים המסומנים בפלואורסצנציה תחת מיקרוסקופ הדיסקציה, הפשיטו בזהירות את הרקמה והקרום המחוברים על העצב הסיאטי הקבוע בעזרת מיקרו מספריים ומיקרו מלקחיים. לאחר מכן, שטפו את העצב עם PBS שלוש פעמים.

לאחר מכן, הניחו את העצב הסיאטי על מגלשה ושמרו אותו ישר. הוסף 80 מיקרוליטר של תמיסה נגד דהייה סביב העצב, ואז הניח עליו תלוש כיסוי. משטחים את כל הרקמה המותקנת בלחץ.

לאחר מכן, הנח את הרקמה השטוחה מתחת למיקרוסקופ האפיפלואורסצנטי ההפוך, מצויד באביזר לרכישת פסיפס ועיבוד תמונה. בעת מדידת אורך האקסונים המתחדשים, עקוב אחר כל האקסונים המסומנים פלואורסצנטיים הניתנים לזיהוי בעצב הסיאטי מאתר הריסוק ועד לקצוות האקסונים הדיסטליים.