הדמיה ביולומינסנט של התקדמות גידול השד במודל עכבר נקבה

התחל עם עכברה שהוזרקה עם תאי גידול שד המבטאים לוציפראז.

תאי הגידול מתרבים באתר ההזרקה ומתפתחים לגידול ראשוני.

הנח את העכבר בתא הדמיה עם זרימת הרדמה כדי להרדים את העכבר.

לאחר מכן, הזריק לוציפרין, מצע ללוציפראז, לעכבר המרדים.

לוציפרין מסתובב ונכנס לתאי הגידול, ומגיב עם לוציפראז כדי לפלוט ביולומינסנציה.

באמצעות מערכת ההדמיה, לכוד את אות הביו-לומינסנציה מהעכבר.

עם הזמן, הגידול מתקדם באתר הראשוני ושולח גרורות לריאות.

רכוש את תמונת העכבר במרווחי זמן קבועים והגדר אזורי עניין.

בהתבסס על עוצמות הביו-לומינסנציה, בנה קינטיקה של גידול גידול עבור שני האתרים.

עם הזמן, עלייה מתמדת באות באתר הגידול הראשוני מצביעה על התפשטות מתמשכת של הגידול.

עם זאת, עלייה חדה בביולומינסנציה של הריאות בנקודות זמן מאוחרות יותר מצביעה על גרורות של תאי גידול.

כדי להתחיל, שמרו על קו התאים 4T1 בתוספת התוסף של Dulbecco's Modified Eagle Medium או DMEM. דגרו את התאים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באטמוספירה לחה המכילה 5 אחוז פחמן דו חמצני.

העבר את קו התאים 4T1 עם הגן Luc2 כדי לבטא לוציפראז, אנזים ביולומינסנט המיוצר באופן מכונן. דגרו על התאים כדי לשמור אותם מוכנים להזרקת עכברים.

חמש דקות לאחר הרדמה והכנה של עכבר נקבה Balb-C, יש להזריק פעמיים פי 10 בעוצמה של חמישה תאי 4T1 המבטאים לוציפראז באופן תת עורי לגב השמאלי באמצעות מזרק אינסולין של 1 מיליליטר. שכן את החיה במשך 4 שבועות לאחר ההזרקה.

לצורך הדמיה, הנח את העכבר המורדם בתנוחת שכיבה גבית בתוך האזור המיועד של ציוד ההדמיה הביולוגי. הזרקו לעכבר תוך הצפק 100 מיקרוליטר תמיסת D-luciferin בריכוז של 15 מיליגרם למיליליטר.

כדי להתאים את פרמטרי ההדמיה, הגדר את מסנן הפליטה פתוח ללא עירור, binning ל-8, F-Stop ל-2 וסוג שדה הראייה ל-D. צלם 20 תמונות bioluminescent במשך 20 דקות עבור כל חיה בכל נקודת קצה של הדמיה, וודא שהתמונות מייצגות שילוב אות של 60 שניות.

באמצעות תוכנת הציוד, הגדר אזורי עניין ספציפיים כדי להבחין בין אותות הגידול הראשוני לגרורות ריאות. זהה אותות ביולומינסנט באתר ההזרקה ובאזור בית החזה שבו מתרחשות גרורות. לחשב את התקדמות הגידול על סמך עוצמות האות הביולוגיות.

באמצעות תמונות שנאספו מדי שבוע, בנה פרופיל קינטי של צמיחה כדי לייצג שינויים בעוצמת האות לאורך זמן הן באתרים ראשוניים והן באתרים גרורתיים. להשוות מגמות עוצמת אות כדי לנתח את התקדמות הגידול והגרורות.