אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מיקרוביולוגיה
0 צפיות • 3:14 דק׳ • November 28th, 2025
התחילו במדיום עשיר בחומרים מזינים שמוכן מהידרוליזאט במבוק ומושלף במלחים חיוניים לתמיכה בפעילות מיקרוביאלית.
הידרוליזט זה מכיל גלוקוז וקסילוז, מקורות הפחמן הנדרשים לתסיסה.
החסן את המדיום בתרבות דלקת ריאות מסוג Klebsiella פראי, שגדלה בתנאים אירוביים סטנדרטיים.
העבר את התרבית לביוריאקטור בסביבה סטרילית וקבע pH חומצי קל, יחד עם תנאי חמצן או מיקרואירוביים מוגבלים.
רמות חמצן נמוכות מכוונות את חילוף החומרים של החיידקים לכיוון תסיסה.
התאים משתמשים תחילה בגלוקוז, שמפרק לפירובט ומומר ל-2,3-בוטנדיול, חומר כימי שימושי ליישומים תעשייתיים.
כאשר הגלוקוז מתרוקן, התאים משתמשים בקסילוז, סוכר בעל חמישה פחמנים, וממירים אותו לפירובאט.
זה מאפשר ייצור איטי יותר של 2,3-בוטנדיול מקסילוז דרך אותו מסלול תסיסה.
תהליך זה מדגיש את ההמרה המיקרוביאלית של סוכרים שמקורם בבמבוק למוצר תסיסה שימושי בתנאי חמצן מוגבלים.
לאחר הכנת חומר התסיסה לפי פרוטוקול הטקסט, יש להכין תרבית זרעים על ידי הוספת K. תאי דלקת ריאות לצלחת, ותרבית במהלך הלילה. לאחר מכן העבר את התרבית לבקבוק בנפח 250 מיליליטר המכיל 50 מיליליטר של מדיום LB.
דגרו את התרבית בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-200 סל"ד במהלך הלילה. מוטנט מסוג פרא, מוטנט הניצן C והמוטנט של ניצן A משמשים לייצור חומצה 2,3-בוטנדיול, R-אצטואין ו-2-קטוגלוקונית בהתאמה. החרינו 50 מיליליטר של תרבית הזרעים לתוך הביוריאקטור.
שמרו על הטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם pH של 6.0 ו-7.0 עבור R-אצטואין ו-2,3-בוטנדיול, בהתאמה. לייצור חומצה קטוגלוקונית 2, שמרו על pH של 7.0 בארבע השעות הראשונות, ואז עברו ל-pH של 5.0. לצורך ייצור 2,3-בוטנדיול, יש לשמור על התרבית בסביבה מיקרואירובית עם תוספת אוויר בקצב של שני ליטר לדקה ו-250 סל"ד.
לייצור R-אצטואין, שמרו על התרבית בסביבה אירובית עם תוספת אוויר של ארבעה ליטר לדקה במהירות 450 סל"ד. לייצור חומצה קטוגלוקונית 2, יש לשמור על תנאים אירוביים גבוהים עם קצב השלמת אוויר וערבוב של ארבעה ליטר לדקה ו-500 סל"ד, בהתאמה.
יש לשלוט במדויק ב-pH, קצב תוספי אוויר וקצב התערובות.